歯周炎治療におけるスケーリングおよびルートプランニングの補助剤としてのアジスロマイシンの効果

臨床歯周検査 歯周パラメーターは、治療前の段階 (T0) および SRP 完了の 4 週間 ± 5 日後に評価されました。 すべての参加者について、性別と年齢が記録され、歯周ポケットの深さ (PPD)、臨床的付着喪失 (CAL)、プロービング時の出血 (BoP) などの歯周パラメータが調べられました。 すべての測定は、手動の歯周プローブ (0106.DT06.CP10、Den Tag、イタリア) を使用して、校正された 1 人の検者によって行われました。 PPD と CAL は、各歯の周りの 6 つの歯周部位 (第 3 大臼歯を含む) で 1 mm 単位で測定され、最大値が考慮されました。 H グループの参加者については、歯肉の炎症の徴候、3 mm を超えるプロービング深度、および BoP は、歯周の健康を保証するために除外されました。

歯周治療は、家庭での口腔衛生指導と SRP で構成されていました。 それは、超音波、グレーシー キュレット、および空気研磨研磨を使用して実行されました。 コンプライアンス管理の取り組みとして、錠剤の数え方や家庭の衛生状態のチェックなどを行いました。

歯肉組織サンプルの収集 正確な免疫組織化学的研究の歯肉生検サンプルのために、適切な歯科処置中に、すべての参加者から損傷を与えることなく、局所麻酔後に約 3x3 mm を切除しました。 治療前（T0、Pグループ）および歯周治療終了後4週間±5日目に、共通の歯および歯周周囲の単一の最も重度の臨床的に適切な部位から、同じまたは最も近い点で行われた歯周炎に冒された歯肉からの生検齲蝕合併症による抜歯、歯肉切除などの処置。 歯周病の健康な患者からの生検は、齲蝕合併症、親知らず、および歯列矯正の適応による抜歯中に得られました。 収集後、生検の半分を 4% ホルマリン溶液で 24 時間固定し、脱水し、パラフィンに包埋し、残りの半分をサイトカイン アッセイ用に調製しました。

免疫組織化学および抗体 厚さ２～３μｍのパラフィン切片を脱パラフィンし、脱水した。 スライドを電子レンジで 23 分間加熱し、冷却し、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) ですすぎ、ブロックされた試薬とインキュベートし、すすぎ、インキュベートすることにより、pH 6 のクエン酸バッファーでの熱によるエピトープ回復を行いました。マウス モノクローナル CD68 マクロファージ抗体 (1:30、クローン PG-M1、Diagnostic BioSystems、オランダ、ハーグ) または抗 CD163 (1:100、クローン 10D6、Diagnostic BioSystems、オランダ、ハーグ)。 次に切片を 2-steps plus Mouse/Rabbit PolyVueTM HRP/DAB Detection System (Diagnostic BioSystems、ハーグ、オランダ) で染色し、Mayer's haemalaun で対比染色しました。 ＰＢＳを陰性対照として使用し、リンパ節組織を陽性対照として使用した。

免疫組織化学染色の評価 СD68+ および CD163+ マクロファージは、細胞浸潤の強い領域で 400 回、光学顕微鏡で細胞数をカウントすることによって推定され、各スライスから 5 つの領域を選択し、5 つのカウントすべてをさらなる統計のために取得しました。 炎症に直接関係するため、細胞浸潤の領域における免疫陽性Mφをカウントした。 10,000 μm2 あたりの細胞数は、免疫陽性細胞密度として計算されました。 写真と計算は、光学顕微鏡Axio Lab.A1（カールツァイス、ゲッティンゲン、ドイツ）（×400）を使用して取得しました。

組織培養 歯肉組織サンプルの一部を、加湿インキュベーターで 37 °C、5 % CO2 の存在下で培養しました。 生検は、10 % (vol/vol) ウシ胎児血清 (Gibco、Thermo Fisher Scientific、Gibco™、米国)、1 % (vol/vol) ペニシリン-ストレプトマイシン (Gibco™、米国)、および 0.2 % (vol/vol) ファンギゾン アンホテリシン B (Gibco™、米国) を 48 時間 [16]。 培養のために、各生検サンプルを、０．４ｍｌの補足ＤＭＥＭを含むＣｏｓｔａｒ（登録商標）２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ－Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｋｅｎｎｅｂｕｎｋ、ＵＳＡ）の別個のウェルに入れた。 インキュベーション後、組織を除去し、培地を 800 g および 4 °C で遠心分離しました。

サイトカインアッセイ 組織培養培地におけるサイトカインアッセイは、ELISAによって提供された。 IL1-β、IL-6、IL-10、および TGF-β 濃度は、市販のキット (Vector Best、ノボシビルスク、ロシア、および MyBioSource、サンディエゴ、米国) で測定しました。 サイトカイン濃度は、メーカーの推奨に従って表されました。

統計分析 Prism 5 ソフトウェア (GraphPad Software、サンディエゴ、米国) を使用して、ノンパラメトリック (記述統計、Wilcoxon マッチドペアの符号順位検定 - 従属結果の比較用、Mann-Whitney 検定 - 独立グループ;事後検定との多重比較のためのノンパラメトリック ANOVA、およびスピアメン相関)。 CD68+/CD163+ 比は、グループ間比較とスピアマン相関チェックによって評価されました。 <0.05の P 値は、すべての分析で統計的に有意であると見なされました。 細胞数の記述統計では、非正規変数分布のためにパーセンタイル範囲も使用されました。