Effetti dell'azitromicina in aggiunta alla detartrasi e alla pianificazione delle radici nel trattamento della parodontite

Esami clinici parodontali I parametri parodontali sono stati valutati nella fase di pre-trattamento (T0) e 4 settimane ±5 giorni dopo il completamento del SRP. Per tutti i partecipanti sono stati registrati sesso ed età e sono stati esaminati i parametri parodontali come la profondità della tasca parodontale (PPD), la perdita di attacco clinico (CAL) e il sanguinamento al sondaggio (BoP). Tutte le misurazioni sono state condotte da un esaminatore calibrato utilizzando una sonda parodontale manuale (0106.DT06.CP10, Den Tag, Italia). PPD e CAL sono stati misurati in sei siti parodontali attorno a ciascun dente (compresi i terzi molari) con l'approssimazione di 1 mm e sono stati presi in considerazione i valori massimi. Per i partecipanti al gruppo H sono stati esclusi i segni di infiammazione gengivale, profondità di sondaggio superiore a 3 mm e BoP per assicurare la salute parodontale.

La terapia parodontale comprendeva istruzioni per l'igiene orale domiciliare e SRP. È stato eseguito utilizzando ultrasuoni, curette Gracey e lucidatura abrasiva ad aria. Le misure per il controllo della conformità includevano il conteggio delle pillole e il controllo dell'igiene domestica.

Raccolta di campioni di tessuto gengivale Per un accurato studio immunoistochimico di campioni bioptici gengivali, circa 3x3 mm sono stati asportati in seguito ad anestesia locale da tutti i partecipanti senza alcun danno, durante appropriate procedure odontoiatriche. Biopsia della gengiva affetta da parodontite eseguita prima del trattamento (Gruppo T0, P) e 4 settimane ±5 giorni dopo il completamento del trattamento parodontale, nello stesso punto o nei punti più vicini, da un singolo sito appropriato dal punto di vista clinico più grave intorno al comune dente e parodontale procedure come l'estrazione del dente a causa di complicanze della carie e le gengivectomie. La biopsia di pazienti parodontalmente sani è stata ottenuta durante l'estrazione del dente a causa di complicazioni della carie, denti del giudizio e indicazioni ortodontiche. Dopo la raccolta, la metà delle biopsie è stata fissata in una soluzione di formalina al 4% per 24 ore di fissazione, disidratata e incorporata in paraffina e un'altra metà è stata preparata per il dosaggio delle citochine.

Immunoistochimica e anticorpi Le sezioni in paraffina, di 2-3 μm di spessore, sono state deparaffinate e disidratate. Il recupero dell'epitopo indotto dal calore in tampone citrato, pH 6, è stato eseguito riscaldando i vetrini nel forno a microonde per 23 minuti, quindi lasciato raffreddare, risciacquato con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), incubato con reagente bloccato, risciacquato e incubato con anticorpi macrofagi monoclonali di topo CD68 (1:30, clone PG-M1, Diagnostic BioSystems, The Hague, The Netherlands) o anti-CD163 (1:100, clone 10D6, Diagnostic BioSystems, The Hague, The Netherlands). Quindi le sezioni sono state colorate con il sistema di rilevamento HRP/DAB PolyVueTM Mouse/Rabbit Plus a 2 passaggi (Diagnostic BioSystems, L'Aia, Paesi Bassi) e controcolorate con l'haemalaun di Mayer. PBS è stato utilizzato come controllo negativo, il tessuto linfonodale come controllo positivo.

La valutazione della colorazione immunoistochimica dei macrofagi СD68 + e CD163 + è stata stimata contando il numero di cellule al microscopio ottico in 400 volte in aree di infiltrazione cellulare intensiva, selezionando 5 regioni da ciascuna fetta e tutti e 5 i conteggi sono stati presi per ulteriori statistiche. I Mφ immunopositivi nelle aree di infiltrazione cellulare sono stati contati, a causa della relazione diretta con l'infiammazione. Il numero di cellule per 10.000 μm2 è stato calcolato come densità cellulare immunopositiva. Le foto e il calcolo sono stati ottenuti utilizzando il microscopio ottico Axio Lab.A1 (Carl Zeiss, Göttingen, Germania) (×400).

Coltivazione dei tessuti Parte dei campioni di tessuto gengivale è stata coltivata in un incubatore umidificato a 37 °C e in presenza del 5% di CO2. Le biopsie sono state coltivate nel mezzo Eagle modificato di Dulbecco (DMEM) integrato con 10% (vol/vol) di siero bovino fetale (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Gibco™, US), 1% (vol/vol) di penicillina-streptomicina (Gibco™, US) e 0,2% (vol/vol) di fungizone amfotericina B (Gibco™, US) per 48 ore [16]. Per la coltura, ciascun campione bioptico è stato posto in un pozzetto separato di piastre Costar® a 24 pozzetti (Corning Incorporated - Life Sciences, Kennebunk, USA), contenenti 0,4 ml di DMEM addizionato. Dopo l'incubazione, i tessuti sono stati rimossi e i terreni di coltura sono stati centrifugati a 800 g e 4 °C.

Saggio delle citochine Il saggio delle citochine nel terreno di coltura tissutale è stato fornito da ELISA. Le concentrazioni di IL1-β, IL-6, IL-10 e TGF-β sono state misurate mediante kit disponibili in commercio (Vector Best, Novosibirsk, Russia e MyBioSource, San Diego, USA). Le concentrazioni di citochine sono state espresse come raccomandato dal produttore.

Analisi statistica L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il software Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, USA) per mezzo di statistiche non parametriche (statistica descrittiva, test Wilcoxon matched-pairs signed-rank - per il confronto dei risultati dipendenti, test di Mann-Whitney - per risultati indipendenti gruppi; ANOVA non parametrica per confronti multipli con test post-hoc e correlazione di Spearmen). Il rapporto CD68+/CD163+ è stato valutato mediante confronti tra gruppi e controllo della correlazione di Spearman. I valori P <0,05 sono stati considerati statisticamente significativi in ​​tutte le analisi. Per le statistiche descrittive dei numeri di cella, sono stati utilizzati anche gli intervalli percentili a causa di distribuzioni di variabili non normali.