류마티스 관절염에서의 NFKB1 및 IKK Epsilon (NUIRA)

RA 진단이 확인된 환자는 DAS28(Disease Activity Score 28)에 따라 a) 임상 활성이 있는 그룹과 b) 임상적 완화가 있는 두 그룹으로 분류되었습니다. 주요 배제 기준은 다른 염증성 또는 자가면역 질환이 있는 환자와 감염이 있는 환자였습니다. 대조군은 건강한 환자로 대표됨 샘플 크기

샘플 크기 계산은 다음 공식을 통해 수행되었습니다.

n= Nz2 pq /d2(N-1) +z2 pq N=30, Z=2.46(신뢰도 99%), p=0.9, q=0.1, d=0.05(정확도 95%). 표본 크기에는 RA 환자 20명이 포함되었습니다.

체중(kg)과 신장(m)은 SECA(mechanical column scale)로 계산되었습니다. 환자들은 체질량 지수(BMI, 체중(Kg)/신장(m)2)에 따라 a) 정상 체중(BMI < 24.9), b) 과체중(24.9 kg/m2 < BMI < 29.9)으로 분류되었습니다. kg/m2) 및 c) 비만(BMI> 30kg/m2).

림프구 추출 ACK Lysing Buffer®(Life Technologies, Grand Island, NY) 키트를 사용하여 말초 혈액에서 림프구를 추출했습니다. 간단히 말해서, EDTA 튜브(BD Vacutainer®, Franklin Lakes, NJ)의 정맥혈 샘플을 5-8분 동안 3500rpm에서 원심분리했습니다. 생성된 중간 백색상을 추출하여 에펜도르프 튜브에 넣었습니다. 1mL의 ACK Lysing Buffer®를 추가하고 조심스럽게 재현탁했습니다. 다시 한번, 현탁액을 5-8분 동안 3500rpm에서 원심분리하고 상청액을 버렸다. 백혈구 패키지가 완전히 하얗게 될 때까지 이 마지막 단계를 반복했습니다. 마지막으로 100mcl의 ACK Lysing Buffer®를 추가하고 나중에 사용하기 위해 -70ºC에서 동결했습니다.

유전적 발현 백혈구 패키지(약 10~15 mg)에서 Magna Pure LC 2.0 Instrument에서 Magna Pure LC RNA isolation kit III(Roche)를 사용하여 메신저 RNA(mRNA) 추출을 수행하였다. A260/A280 nm 흡광도 비율은 >1.8(품질)이었고 NanoPhotometer(Implen GmbH, Germany)로 설정한 260 nm에서의 흡광도를 측정하여 총 RNA 농도를 계산했으며 추출물을 20 μg의 DNA 농도로 조정했습니다. PCR 반응.

이어서, Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit(Roche Applied Science)를 사용하여 cDNA를 합성하였다. 7500 Fast Real Time PCR System(Applied Biosystems, Applera UK, Cheshire , UK), TaqMan® Universal PCR Master Mix 및 각 유전자 NF-KB1(Hs00765730-m1), IKK 엡실론(Hs01063858-m1) 및 18S(Hs99999901-s1)에 대한 특정 프로브 혼합, (Applied Biosystems, Applera UK, Cheshire , 영국).

서로 다른 두 그룹에서 얻은 Ct에 따라 Pfaffl 상대 정량법을 통해 상대적 발현 단위를 계산하였으며, 이를 건강한 환자를 대조군으로 사용하였다.

통계 분석 통계 분석은 Sigmaplot 소프트웨어 버전 12.0을 통해 수행되었습니다. 파라메트릭 및 비모수 테스트는 변수 분포에 대한 함수로 사용되었습니다. 그룹을 비교하기 위해 수행된 파라메트릭 테스트 중 학생의 T-테스트가 포함되었습니다. 적용된 비모수 테스트는 Mann-Whitney U 테스트 및 Shapiro-Wilk 테스트였습니다. 마지막으로 SPSS 소프트웨어 버전 22.0을 사용하여 NF-KB1/IKK 입실론의 유전적 발현 분석을 위해 ROC(수신기 작동 특성)를 사용했습니다.