급성 심근경색에서 관상동맥 혈전의 단백체 프로파일링

허혈성 심장 질환은 장애 조정 수명(disability-adjusted life-years)을 기준으로 평가할 때 전 세계 질병 부담의 주요 원인입니다.

ST-상승 심근경색증(STEMI)은 환자의 90%에서 관상동맥 폐쇄성 혈전증과 관련이 있으며, 비 ST 상승 심근경색증(NSTEMI)은 26%에서만 관련이 있습니다. 이와 관련하여 관상동맥 혈전의 구성에 대한 관심이 높아지고 있습니다. 급성 STEMI에서 폐색 혈전의 혈소판 및 피브린 함량은 허혈 시간에 크게 의존하므로 이것이 관상 재관류에 사용되는 약물 또는 장치의 효능에 상당한 영향을 미칠 수 있음을 추론할 수 있습니다.

혈소판, 적혈구, 단핵구 및 호중구와 같은 여러 순환 세포 유형과 혈전증 과정을 조절하는 혈장 분자 중에서 혈소판은 혈전의 주요 세포 구성 요소를 구성하며 혈전 형성에 필수적입니다. 혈전증에서 혈소판의 역할이 깊이 특성화되었지만 인간 관상 동맥 혈전 내 혈소판 활성화 및 국소 부착의 기본 분자 메커니즘, 폐색 혈전의 구성, 시간 변화 및 다른 세포와의 상호 작용은 명확하게 밝혀지지 않았습니다. 혈전 물질에 대한 접근성이 어렵습니다. 혈전 흡인은 STEMI 및 NSTEMI에 대한 1차 경피적 관상동맥 중재술(PCI)의 보조 전략으로서 논란의 여지가 있는 역할을 하지만, 관상 동맥 트리에서 진행된 흡인 카테터에 의한 폐색 혈전 추출에 의존하며 얻을 수 있는 독특한 기회를 구성합니다. AMI로 고통받는 환자의 관상 동맥 혈전.

시간 경과 및 병리생리학에 따라 혈전 형성을 담당하는 가변 분자 경로를 정의하면 새로운 치료 전략을 위한 길을 열 수 있습니다.

연구의 가설 관상동맥 혈전은 형성(미란, 플라크 파열 또는 금속 스트럿 노출)의 병태생리학 및 증상 발병으로부터 시간 경과에 따라 상당한 변형을 겪습니다.

관상동맥 혈전의 분자 구성과 단백질체 및 대사체학 패턴의 정확한 정의는 새로운 치료 전략의 목표를 식별할 수 있습니다.

이 연구의 목적은 AMI에서 관상동맥 혈전의 분자 구성을 밝히고, 분자 수준에서 혈전 형성과 관련된 표현형 변경을 이해하고, 질병의 발병과 관련되거나 혈전 형성 시간과 관련된 새로운 잠재적 요인을 강조하는 것입니다.

STEMI 및 폐쇄된 경색 관련 동맥 또는 NSTEMI 및 범인 동맥의 눈에 보이는 혈전이 있는 ACS에 연속적으로 입원한 환자는 혈전 흡인에 적합한 것으로 간주됩니다. PCI는 대퇴골 접근 또는 요골 접근과 함께 표준 절차로 수행됩니다. 모든 환자는 아세틸살리실산(매일 100mg)과 P2Y12 억제제인 ​​클로피도그렐(매일 600mg, 이후 75mg), 프라수그렐(매일 60mg, 이후 10mg) 또는 티카그렐러(매일 180mg)를 투여받게 됩니다. 동맥초를 삽입한 후 모든 환자는 70IU/kg의 헤파린을 투여받습니다.

병변을 가로질러 가이드와이어를 배치한 후 부드러운 흡입으로 혈전 흡인 시스템을 진행하고 범인 병변을 통해 여러 통로를 통과시킵니다.

등록된 각 환자의 동결건조된 혈전은 단백질, 대사산물(아미노산 및 아실카르니틴) 및 극성 지질 측면에서 광범위한 분자 특성화를 거칠 것입니다.

혈전에서 극성 대사산물과 지질을 추출하고 검증된 방법론에 따라 분석합니다. 중수소화된 아미노산 및 카르니틴 내부 표준과 리소-스핑고미엘린 100μg/ml를 내부로 포함하는 330μL의 메탄올 용액에 습식 혈전 5mg을 첨가합니다. 지질체학의 표준. 이러한 용액은 45°C에서 50분 동안 배양되고 마지막으로 두 개의 분취량으로 나뉩니다. 첫 번째는 이전에 보고된 CSF 분석에 이미 사용된 LC-MS/MS 방법에 따라 아미노산 및 아실-카르니틴을 분석하는 데 사용됩니다. 두 번째 분취량은 LC-MS/MS로 인지질을 스크리닝하는 데 사용됩니다. 얻은 데이터는 MarkerLynx 및 NeoLynx 소프트웨어를 사용하여 정량화되고 GraphPad Prism, Simca P+ 및 MetaboAnalyst 소프트웨어를 사용하여 통계적으로 조사됩니다.

동결건조된 혈전은 필터 지원 샘플 준비(FASP) 프로토콜에 의해 분해됩니다. 그런 다음 이미 보고된 대로 표현된 단백질을 식별하고 동시에 정량화하기 위해 라벨 없는 샷건 프로테오믹스 실험을 수행하는 플랫폼 nanoLC-ESI-QTOF-MS/MS에 의해 각 샘플에 대해 기악 삼중체를 획득합니다. 본 연구의 결과는 급성 심근경색에서 관상동맥 혈전 동안 발현되는 단백질 목록으로 생물정보학 분석에 활용될 수 있을 것이다.

데이터는 전용 소프트웨어(Profile Analysis, Bruker, Markerlynx)에서 처리됩니다. 강조 표시된 대사산물/단백질은 데이터베이스 및 단편화 분석을 통해 식별됩니다.

특히 Metabolomics 및 lipidomics의 경우, 데이터를 처리하여 피크 디콘볼루션 및 정렬, 잡음 제거 및 총 이온 수 정규화를 획득하여 분석된 각 샘플에 대해 검출된 모든 피크에 대한 상대적 강도와 관련된 질량 쌍 테이블을 제공합니다. 그런 다음 데이터 매트릭스는 SIMCA-P + 11.0(Umetrics AB, Umeå, Sweden)을 사용하여 다변량 분석(PCA; PLS-DA)에 사용됩니다.

다중 오믹스 연구 및 데이터 처리를 통해 연구된 각 임상 그룹의 프레임워크로 흥미로운 분자 패널을 사용할 수 있습니다. 그런 다음 이러한 생물학적 화합물은 급성 심근 경색에서 관상 동맥 혈전의 생리학 및 분자 항상성에 대한 기능적 의미를 재건하기 위해 in-silico 분석을 받게 됩니다. 이러한 데이터의 메타 분석을 수행하기 위해 우리는 주로 Ingenuity Pathways Analysis(IPA)(Ingenuity Systems, Mountain View, CA)를 사용합니다. 경로 분석 및 유전자 온톨로지를 통해 특정 표현형에 대해 억제 및/또는 자극된 대사 경로 및 2차 유전자/단백질을 식별하고 결과적으로 잠재적 이펙터 분자 및/또는 약리학적 표적을 분류할 수 있습니다.