急性心肌梗死冠状动脉血栓的蛋白质组学分析

根据伤残调整寿命年评估，缺血性心脏病是造成全球疾病负担的主要原因。

ST 段抬高型心肌梗塞 (STEMI) 与 90% 患者的冠状动脉闭塞性血栓形成相关，非 ST 段抬高型心肌梗塞 (NSTEMI) 仅与 26% 的病例相关。 在这方面，人们越来越关注冠状动脉血栓的成分。 在急性 STEMI 中，闭塞性血栓中的血小板和纤维蛋白含量高度依赖于缺血时间，因此可以推断这可能对用于冠状动脉再灌注的药物或装置的疗效产生重大影响。

在几种循环细胞类型——血小板、红细胞、单核细胞和中性粒细胞——以及血浆分子中，调节血栓形成过程的血小板构成血栓的主要细胞成分，它们的激活对于血栓形成至关重要。 尽管血小板在血栓形成中的作用已得到深入研究，但血小板活化和人冠状动脉血栓粘着斑的分子机制、闭塞血栓的组成、时间变化及其与其他细胞的相互作用尚未得到明确阐明，主要是由于难以接近血栓材料。 血栓抽吸作为 STEMI 和 NSTEMI 直接经皮冠状动脉介入治疗 (PCI) 的辅助策略存在争议，但它依赖于通过抽吸导管抽取闭塞性血栓，在冠状动脉树中推进并构成获得来自 AMI 患者的冠状动脉血栓。

根据时间流逝和病理生理学定义负责血栓形成的可变分子途径可能为更新的治疗策略铺平道路。

研究假设 冠状动脉血栓根据形成的病理生理学（侵蚀、斑块破裂或金属支柱暴露）和症状发作的时间推移而发生重大变化。

冠状动脉血栓的分子组成及其蛋白质组学和代谢组学模式的确切定义可能会确定更新治疗策略的目标。

该研究的目的是：阐明 AMI 中冠状动脉血栓的分子组成，在分子水平上了解与血栓形成相关的表型改变，突出与疾病发作有关或与血栓形成时间相关的新的潜在因素。

连续一系列因 ACS 而入院的患者，无论是 STEMI 和阻塞的梗塞相关动脉，还是 NSTEMI 和罪犯动脉中可见的血栓，都将被认为适合血栓抽吸。 PCI 将通过标准程序进行，采用股骨或桡骨通路。 所有患者都将接受乙酰水杨酸（每天 100 毫克）和 P2Y12 抑制剂 - 氯吡格雷（600 毫克，然后每天 75 毫克）、普拉格雷（60 毫克，然后每天 10 毫克）或替格瑞洛（每天 180 毫克）。 插入动脉鞘后，每位患者将接受 70 IU/kg 的肝素。

导丝穿过病灶定位后，血栓抽吸系统将通过轻柔的抽吸推进，并通过罪魁祸首病灶进行多次穿刺。

来自每个登记患者的冻干血栓将在蛋白质、代谢物（氨基酸和酰基肉碱）和极性脂质方面进行广泛的分子表征。

将按照经过验证的方法提取和分析血栓中的极性代谢物和脂质：将 5 mg 湿血栓添加到 330 μL 的甲醇溶液中，其中含有氨基酸和肉碱的氘化内标以及 100 µg/ml 溶血鞘磷脂作为内标脂质组学标准。 这些溶液将在 45°C 下孵育 50 分钟，最后分成两份。 第一个将按照我们的 LC-MS/MS 方法用于分析氨基酸和酰基肉碱，该方法已用于 CSF 的分析，如先前报道的那样。 第二个等分试样将用于通过 LC-MS/MS 筛选磷脂。 获得的数据将使用 MarkerLynx 和 NeoLynx 软件进行量化，并使用 GraphPad Prism、Simca P+ 和 MetaboAnalyst 软件进行统计调查。

冻干血栓将通过过滤辅助样品制备 (FASP) 协议进行消化。 然后，将通过 nanoLC-ESI-QTOF-MS/MS 平台执行无标签鸟枪蛋白质组学实验，为每个样品采集仪器一式三份，以便识别并同时量化已报告的表达蛋白质。 这项研究的结果将是急性心肌梗死冠状动脉血栓期间表达的蛋白质列表，可用于生物信息学分析。

数据将由专用软件（Profile Analysis、Bruker、Markerlynx）处理。 突出显示的代谢物/蛋白质将通过数据库和碎片分析来识别。

特别是对于代谢组学和脂质组学，数据将被处理以获得峰解卷积和对齐、去噪和总离子计数归一化，以给出质量对表以及每个分析样品的所有检测到的峰的相关相对强度。 然后，数据矩阵将用于使用 SIMCA-P + 11.0（Umetrics AB，于默奥，瑞典）的多元分析（PCA；PLS-DA）。

通过多组学研究和数据处理，将提供一组有趣的分子作为研究的每个临床组的框架。 然后将对这些生物化合物进行计算机分析，以重建它们在急性心肌梗死冠状动脉血栓的生理学和分子稳态中的功能意义。 为了对数据进行这样的元分析，我们将主要使用 Ingenuity Pathways Analysis (IPA)，（Ingenuity Systems，Mountain View，CA）。 通过途径分析和基因本体论，将有可能识别代谢途径和针对特定表型抑制和/或刺激的次级基因/蛋白质，并因此对潜在效应分子和/或药理学靶标进行分类。