급성 괴사성 췌장염에서 CMV 재활성화

연구의 배경 및 근거 급성췌장염은 흔히 접하는 전신질환 중 하나로 예후가 좋은 경미한 질환부터 중환자실에 입원하게 되는 중증질환에 이르기까지 다양한 양상을 보인다. 높은 사망률과 관련이 있습니다. 개정된 애틀랜타 분류(2012)에 따르면 급성 췌장염은 현재 괴사의 유무에 따라 괴사성 췌장염과 간질성 부종성 췌장염(IEP)의 두 가지 아형으로 나뉩니다. 중증 급성 췌장염에서 염증은 4가지 뚜렷한 아형이 확인되는 췌장 주위 체액 저류로 이어집니다. 괴사성 췌장염 환자에서 발생하는 급성 괴사 콜렉션(ANC) 및 벽으로 막힌 괴사(WON)에는 무균 또는 감염일 수 있는 다양한 양의 체액 및 괴사 잔해가 포함되어 있습니다. 무균 괴사의 사망률은 비교적 낮지만(5%-10%), 괴사성 췌장 및 췌장 주변 조직/액 축적의 중복 감염은 사망률을 상당히 증가시킵니다(20%-30%).

배양된 감염된 췌장 괴사는 일반적으로 환자의 60-87%에서 단일 미생물군을 나타내고 환자의 13-40%에서 다중 미생물군을 나타냅니다. 분리된 가장 일반적인 유기체는 그람 음성 박테리아, 주로 Escherichia coli 및 Klebsiella pneumonia, 그 다음은 그람 양성 박테리아입니다. ICU에서 항생제 요법의 사용이 증가함에 따라 췌장 진균 감염의 발생률도 증가하고 있습니다. 칸디다 종에 의해 주로 발생하는 진균성 췌장 감염은 세균성 췌장 감염만 있는 환자보다 입원 기간이 더 길고 1년 생존율이 더 낮은 최대 절반에서 확인되었습니다.

전통적으로 중환자는 면역 능력이 있는 것으로 간주되었지만 패혈증의 존재와 면역 조절 효과는 휴면 바이러스 감염의 재활성화로 이어질 수 있습니다. 최근 몇 년 동안 중환자에서 거대세포바이러스(CMV) 재활성화는 71%의 높은 발생률로 인식되었습니다. 면역 조절 효과로 인한 패혈증은 CMV 재활성화에 기여하는 여러 전사 인자를 활성화하는 능력이 있는 TNF-알파 및 IL-1베타와 같은 전염증성 사이토카인의 방출로 인해 CMV의 재활성화로 이어질 수 있습니다. 연구에 따르면 중환자의 CMV 감염은 ICU에 입원한 후 첫 2일 이내에 감지할 수 없는 IFN-γ T 세포 반응과 일관되게 연관되어 있으며 바이러스 부하는 IFN-γ T 세포 반응과 반비례 관계가 있는 것으로 나타났습니다. 면역 체계 마비, Th1 세포 기능 감소, IL-10 생산 증가(항염증), 인터페론 생산과 관련된 자연 살해 세포(NK)에 양적, 질적으로 영향을 미치는 전체 림프구 감소증을 나타내는 패혈증 환자에서도 유사한 결과가 발견되었습니다.

연구에 따르면 CMV 재활성화가 있는 중환자의 장기 부전 비율과 사망률이 상당히 높다고 기록되어 있습니다. Itwenty-two 연구를 포함하여 면역 능력이 있는 중환자에서 CMV 재활성화와 임상 결과 사이의 연관성을 조사하기 위한 체계적 검토에서 CMV 재활성화는 증가된 ICU 사망률, 전체 사망률, 기계 환기 기간, 병원 감염 및 ICU 기간과 관련이 있었습니다. 머무르다. CMV 재활성화는 특정 중환자 코호트에서도 연구되어 사망률에 미치는 영향을 나타냅니다. 면역적격 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS) 환자의 사망률에 대한 CMV 재활성화의 효과도 연구되었습니다. 399명의 ARDS 환자 중 68%가 CMV 혈청양성이었고 이들 중 27%에서 재활성화가 발생했으며 이는 전반적인 ICU 사망률 증가와 관련이 있었습니다. 패혈성 쇼크 코호트(환자 329명)의 또 다른 연구에서 헤르페스 바이러스 재활성화는 사전 면역결핍이 없는 환자의 68%에서 기록되었으며 재활성화가 사망률과 독립적으로 연관될 수 있다고 결론지었습니다.

그러나 현재 급성 괴사성 췌장염(ANP) 환자에서 CMV 재활성화를 조사한 연구는 없습니다. 연구자들은 ANP 중환자에서 CMV 재활성화의 유병률과 바이러스 부하 동역학을 연구하는 것을 목표로 했습니다.

목적 급성 괴사성 췌장염을 앓는 중환자 성인 환자에서 거대세포 바이러스(CMV) 재활성화의 유병률 및 바이러스 부하 동역학을 연구합니다.

방법론 연구 설계 이 전향적 관찰 연구는 IEC(Institutional Ethics Committee)의 승인 후 Lucknow의 SGPGIMS 위장병학 및 미생물학과와 협력하여 중환자 치료 의학과에서 수행될 것입니다.

연구 프로토콜 연구 기간 동안 급성 괴사성 췌장염 진단을 받은 모든 성인 ICU 환자가 포함되는 것으로 간주됩니다. 포함 및 제외 기준에 따라 이들 환자는 혈액 내 항 CMV IgG 항체의 존재에 대해 스크리닝됩니다. 환자가 IgG 혈청 양성이고 포함/제외 기준을 충족하는 경우 연구에 포함되고 ICU 체류 기간 동안 CMV 재활성화를 위해 후속 조치를 받게 됩니다. CMV 재활성화 환자의 경우, 바이러스 부하 동역학이 향후 2주 동안 추가로 추적될 것입니다.

샘플 수집 혈액 샘플: 기존 정맥 카테터에서 EDTA 바이알에 혈액 1.0ml를 매주 수집하여 ICU에 머무는 동안 또는 질병의 10주차(둘 중 먼저 도래하는 시점)에 CMV 재활성화를 찾습니다.

경피적 배액: 환자가 췌장 근처에 복부 배액이 있는 경우, ICU 체류 기간 또는 질병 10주차(둘 중 먼저 도래하는 시점)에 CMV 재활성화를 찾기 위해 매주 멸균 용기에 2.0ml를 수집합니다.

췌장 괴사: 환자가 괴사 수술을 받은 경우, 멸균 용기에 췌장 괴사를 채취합니다(1회).

IgG 항체 검출을 위한 실험실 분석 ELISA: 수집된 혈청은 제조업체 권장 사항에 따라 ELISA를 통해 IgG 항체에 대해 테스트됩니다. (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). 컷오프는 키트 제조업체에서 0.5 WHO IU/ml(캘리브레이터 2)로 설정합니다. 0.5 WHO IU/ml보다 높은 농도의 샘플은 CMV IgG에 대해 양성으로 간주됩니다. 모든 샘플은 이중으로 테스트됩니다.

CMV 정량적 실시간 PCR:

DNA 추출: DNA 추출은 QIAamp DNA 키트(Qiagen, Inc., Valencia, CA)를 사용하여 샘플 200μl에서 수행됩니다. 그런 다음 60μl의 Tris(10mM, pH 8.0)를 사용하여 DNA를 용출하고 10μl의 DNA를 각 PCR에 사용합니다. 추출된 DNA는 추가 작업을 위해 -800C에 보관됩니다.

바이러스 검출을 위한 정량적 실시간 PCR: 10μL의 추출된 DNA, 12.5μL의 2X PCR 버퍼 및 1.5μL의 AgPath RT-PCR 시약(Thermo Fisher Scientific , Massachusetts USA) 및 다른 곳에 기술된 1 μL 프라이머 및 프로브 서열. 모든 올리고뉴클레오티드는 미국 Thermo Fisher Scientific에서 합성 및 조달할 것이며 열 순환은 Applied bio system 7500을 사용하여 95°C에서 3분 동안 수행한 다음 95°C에서 15초 동안, 58°C에서 30초 동안 40주기를 수행합니다. 실시간 PCR 시스템(Thermo Fisher Scientific, Massachusetts USA). 각 테스트는 5개의 정량적 컨트롤로 구성되며 그에 따라 결과가 해석됩니다.

정의 급성 괴사성 췌장염: 이것은 임상 징후-증상/검사실 매개변수 및 조영증강 CT(CECT) 스캔에서 췌장의 비증강 영역의 존재에 기초하여 진단됩니다.

CMV 재활성화: CMV 재활성화 진단을 위한 컷오프는 >1000 copies/ml의 값으로 간주됩니다.

데이터 수집 포함된 환자의 인구통계학적 및 관련 임상 특성은 구조화된 사례 보고서 형식으로 수집됩니다.

샘플 크기 및 통계 분석 스크리닝된 급성 괴사성 췌장염 중 환자의 95%가 IgG 혈청 양성 반응을 보일 것으로 예상됩니다. 혈청 양성(IgG) 환자가 50%라고 가정하면 ICU에 머무는 동안 거대세포 바이러스(CMV) 재활성화가 발생할 것입니다. 추정 유병률(즉, 예상 범위 35~65%), 양측 95% 신뢰 구간에서 예상 표본 크기는 43입니다. 이 연구는 18개월의 시간 제한이 있으므로 연구 기간 동안 모든 적격 환자를 선별하고 이 연구에 포함할 것인지 고려합니다. 수사관은 약 50 명의 환자를 예상하고 있습니다.

연속 변수의 기술 통계는 평균 ± 표준 편차/중앙값(사분위수 범위)으로 표시되는 반면 범주형 변수는 빈도(%)로 적절하게 표시됩니다. 스튜던트 t-테스트(적절한 경우 독립 및 대응 표본 t-테스트) 또는 비모수적 방법을 사용하여 두 그룹 간의 평균/중간값을 비교하는 반면 카이 제곱 테스트 또는 피셔 정확 테스트를 사용합니다. 비율을 비교하기 위해 CMV 재활성화 발생률을 계산하고 단변량 및 다변량 Cox 비례 위험 모델을 사용하여 인구통계학적 및 임상적 요인과의 연관성을 평가합니다. p-값 < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다. 사회 과학용 통계 패키지 버전-23(SPSS-23, IBM, Chicago, USA) 및 MedCalc 소프트웨어가 데이터 분석에 사용됩니다.