Een nieuwe mutatie van het Spectrin-gen

Mutaties van spectrine (Sp) waarbij de Sp-heterodimeer-zelfassociatieplaats (het I-domein van Sp) betrokken is, vertegenwoordigen de meest voorkomende groep membraanskeletdefecten bij erfelijke elliptocytose (HE) en een nauw verwante aandoening, erfelijke pyropoikilocytose (HPP). HPP wordt gekenmerkt door extreme anisocytaire microcytose, een ernstig zelfassociatiedefect van spectrinedimeer en spectrinedeficiëntie. De conventionele verklaring voor de verschillende fenotypes is dat HPP-subjecten samengestelde heterozygoten zijn voor een sp-defect dat de assemblage van sp-tetrameren verstoort en een tweede defect dat resulteert in verminderde synthese van functionele sp. HE-proefpersonen hebben daarentegen een normaal spectrinegehalte en een minder ernstig sp-zelfassociatiedefect. De klinische expressie van HE/HPP wordt beïnvloed door de overerving van modificerende factoren zoals de Sp hypomorfe mutatie, LELY. LELY is een allel met lage expressie van het Sp-gen dat wordt gekenmerkt door een C>G-mutatie in codon 1857 van exon 40 en een C>T -12-mutatie in intron 45 die verantwoordelijk is voor het gedeeltelijk overslaan van exon 46, wat essentieel is voor de functionele assemblage van /bsp dimeren.

GEVAL RAPPORT:

Hier beschrijven we vier leden uit een familie van Noord-Europese afkomst waarin leden een verschillende erytrocytmorfologie hadden, variërend van atypische HPP tot HE tot normaal en een nieuwe Sp-mutatie. Kwantificering van RBC-membraaneiwitten van de propositus met atypische niet-microcytische HPP onthulde 48% spectrinedimeren (controle 10%) als gevolg van een duidelijke toename van het 74 kD I Sp-peptide. Er was slechts een lichte afname in de verhouding spectrine/band 3, die correleerde met de normocytische morfologie. Er was ook een abnormaal Sp-peptide bij 41 kD, wat de aanwezigheid van LELY suggereert. Sequentiebepaling van zijn Sp-gen onthulde heterozygositeit voor een nieuwe mutatie in exon 2, codon 34: CGG->CCG (Arg>Pro) en heterozygositeit voor LELY. Deze mutaties waren ook aanwezig bij zijn broer en dochter die HE hebben, terwijl een andere zoon, die Arg34Pro had, maar niet LELY, herhaaldelijk de normale morfologie heeft bevestigd.

We zijn van plan om 11 andere familieleden te screenen waarvan wordt vermoed dat ze HPP of HE hebben. Er worden bloedmonsters afgenomen en het volgende wordt uitgevoerd:

1. Kwantificering van erytrocyten (RBC) membraaneiwitten
2. DNA-extractie uit de WBC en screening op spectrin-mutatie met restrictie-enzymen (indien nodig zullen we het spectrin-gen sequensen)
3. Kwantitatieve real-time PCR-testen zullen worden uitgevoerd op RNA om de genexpressie van het spectrine te beoordelen
4. Anamnese, Klinisch onderzoek, CBC, chemie en uitstrijkje van perifeer bloed

Kwantificering van RBC-membraaneiwitten zal gebeuren door te kijken naar de abnormale toename van de hoeveelheid spectrinedimeren bij patiënten met HPP (controle 10%). We zullen ook kijken naar het DNA voor bekende of nog niet gerapporteerde mutaties in het spectrin-gen en we zullen de expressie van het spectrin-gen correleren met betrekking tot het niveau van spectrin-eiwit in het RNA.

Er wordt geen statistische analyse uitgevoerd. Dit is een observatiestudie die is ontworpen om klinische kenmerken te correleren met de bovengenoemde testresultaten.