Una nuova mutazione del gene spettrina

Le mutazioni della spettrina (Sp) che coinvolgono il sito di autoassociazione dell'eterodimero Sp (il dominio I di Sp) rappresentano il gruppo più comune di difetti scheletrici di membrana nell'ellissocitosi ereditaria (HE) e un disturbo strettamente correlato, la piropoichilocitosi ereditaria (HPP). L'HPP è caratterizzato da un'estrema microcitosi anisocitica, un grave difetto di autoassociazione del dimero della spettrina e un deficit di spettrina. La spiegazione convenzionale per i diversi fenotipi è che i soggetti HPP sono eterozigoti composti per un difetto sp che interferisce con l'assemblaggio del tetramero sp e un secondo difetto che si traduce in una ridotta sintesi di sp funzionale. Al contrario, i soggetti HE hanno un contenuto di spettrina normale e un difetto di autoassociazione sp meno grave. L'espressione clinica di HE/HPP è influenzata dall'ereditarietà di fattori modificanti come la mutazione ipomorfa Sp, LELY. LELY è un allele a bassa espressione del gene Sp caratterizzato da una mutazione C>G nel codone 1857 dell'esone 40 e da una mutazione C>T -12 nell'introne 45 che è responsabile del salto parziale dell'esone 46, essenziale per il funzionamento assemblaggio di /b sp dimeri.

CASO CLINICO:

Qui descriviamo quattro membri di una famiglia di discendenza nordeuropea in cui i membri avevano una morfologia eritrocitaria diversa che andava da HPP atipico a HE a normale e una nuova mutazione Sp. La quantificazione delle proteine ​​​​di membrana RBC del proposito con HPP atipico non microcitico ha rivelato il 48% di dimeri di spettrina (controllo 10%) a causa di un marcato aumento del peptide I Sp 74kD. C'era solo una leggera diminuzione del rapporto spettrina/banda 3, che correlava con la morfologia normocitica. C'era anche un peptide Sp anormale a 41kD che suggerisce la presenza di LELY. Il sequenziamento del suo gene Sp ha rivelato l'eterozigosi per una nuova mutazione nell'esone 2, codone 34: CGG->CCG (Arg>Pro) e l'eterozigosi per LELY. Queste mutazioni erano presenti anche nel fratello e nella figlia che hanno HE, mentre un altro figlio, che aveva Arg34Pro, ma non LELY, ha ripetutamente confermato la normale morfologia.

Abbiamo in programma di sottoporre a screening altri 11 membri della famiglia sospettati di avere HPP o HE. Verranno prelevati campioni di sangue e verranno eseguite le seguenti operazioni:

1. Quantificazione delle proteine ​​di membrana degli eritrociti (RBC).
2. Estrazione del DNA dal WBC e screening per la mutazione della spettrina con enzimi di restrizione (se necessario sequenzieremo il gene della spettrina)
3. Il test quantitativo Real Time PCR sarà effettuato su RNA per valutare l'espressione genica della spettrina
4. Anamnesi, esame clinico, emocromo, chimica e striscio di sangue periferico

La quantificazione delle proteine ​​di membrana dei globuli rossi sarà effettuata cercando l'aumento anormale della quantità di dimeri di spettrina nei pazienti con HPP (controllo 10%). Esamineremo anche il DNA per eventuali mutazioni note o non ancora riportate nel gene della spettrina e correleremo l'espressione del gene della spettrina rispetto al livello della proteina spettrina nell'RNA.

Non verrà effettuata alcuna analisi statistica. Questo è uno studio di osservazione progettato per correlare le caratteristiche cliniche con i risultati dei test sopra menzionati.