Nowa mutacja genu Spectrin

Mutacje spektryny (Sp) obejmujące miejsce samoasocjacji heterodimeru Sp (domena I Sp) stanowią najczęstszą grupę defektów szkieletu błonowego w dziedzicznej eliptocytozie (HE) i blisko spokrewnionym zaburzeniu, dziedzicznej piropoikilocytozie (HPP). HPP charakteryzuje się ekstremalną mikrocytozą anizocytarną, poważnym defektem samoasocjacji dimeru spektryny i niedoborem spektryny. Konwencjonalnym wyjaśnieniem różnych fenotypów jest to, że osoby z HPP są złożonymi heterozygotami z powodu defektu sp, który zakłóca składanie sp tetrameru i drugiego defektu, który powoduje zmniejszoną syntezę funkcjonalnego sp. W przeciwieństwie do tego, osoby z HE mają normalną zawartość spektryny i mniej poważny defekt samoasocjacji sp. Na kliniczną ekspresję HE/HPP wpływa dziedziczenie czynników modyfikujących, takich jak hipomorficzna mutacja Sp, LELY. LELY jest allelem o niskiej ekspresji genu Sp charakteryzującym się mutacją C>G w kodonie 1857 eksonu 40 i mutacją C>T-12 w intronie 45, który jest odpowiedzialny za częściowe pominięcie eksonu 46, co jest istotne dla funkcjonowania montaż dimerów /b sp.

OPIS PRZYPADKU:

Tutaj opisujemy czterech członków z rodziny pochodzenia północnoeuropejskiego, w której członkowie mieli różną morfologię erytrocytów, od nietypowej HPP do HE do normalnej i nowej mutacji Sp. Oznaczenie ilościowe białek błonowych RBC propositus z atypową niemikrocytarną HPP ujawniło 48% dimerów spektryny (kontrola 10%) z powodu znacznego wzrostu peptydu 74 kD I Sp. Wystąpił tylko niewielki spadek stosunku spektryna/prążek 3, co korelowało z morfologią normocytarną. Wystąpił również nieprawidłowy peptyd Sp przy 41 kD, co sugeruje obecność LELY. Sekwencjonowanie jego genu Sp wykazało heterozygotyczność nowej mutacji w eksonie 2, kodon 34: CGG->CCG (Arg>Pro) oraz heterozygotyczność LELY. Mutacje te były również obecne u jego brata i córki, którzy mają HE, podczas gdy inny syn, który miał Arg34Pro, ale nie LELY, wielokrotnie potwierdził prawidłową morfologię.

Planujemy przebadać 11 innych członków rodziny, u których podejrzewa się HPP lub HE. Zostaną pobrane próbki krwi i wykonane zostaną:

1. Oznaczanie ilościowe białek błonowych erytrocytów (RBC).
2. Ekstrakcja DNA z białych krwinek i badanie przesiewowe pod kątem mutacji spektryny za pomocą enzymów restrykcyjnych (w razie potrzeby zsekwencjonujemy gen spektryny)
3. Ilościowe testy PCR w czasie rzeczywistym zostaną przeprowadzone na RNA w celu oceny ekspresji genu spektryny
4. Wywiad, badanie kliniczne, CBC, chemia i rozmaz krwi obwodowej

Oznaczenie ilościowe białek błonowych RBC zostanie przeprowadzone poprzez poszukiwanie nieprawidłowego wzrostu ilości dimerów spektryny u pacjentów z HPP (kontrola 10%). Przyjrzymy się również DNA pod kątem wszelkich znanych lub jeszcze niezgłoszonych mutacji w genie spektryny i skorelujemy ekspresję genu spektryny z poziomem białka spektryny w RNA.

Żadna analiza statystyczna nie zostanie przeprowadzona. Jest to badanie obserwacyjne mające na celu skorelowanie cech klinicznych z wyżej wymienionymi wynikami testów.