Uma nova mutação do gene Spectrin

As mutações da espectrina (Sp) envolvendo o sítio de auto-associação do heterodímero Sp (o domínio I de Sp) representam o grupo mais comum de defeitos esqueléticos da membrana na eliptocitose hereditária (HE) e um distúrbio intimamente relacionado, a piropoiquilocitose hereditária (HPP). A HPP é caracterizada por microcitose anisocítica extrema, um grave defeito de auto-associação do dímero de espectrina e deficiência de espectrina. A explicação convencional para os diferentes fenótipos é que os indivíduos HPP são heterozigotos compostos para um defeito sp que interfere na montagem do tetrâmero sp e um segundo defeito que resulta na síntese diminuída de sp funcional. Em contraste, indivíduos com HE têm conteúdo de espectrina normal e um defeito de auto-associação sp menos grave. A expressão clínica de HE/HPP é influenciada pela herança de fatores modificadores, como a mutação hipomórfica Sp, LELY. LELY é um alelo de baixa expressão do gene Sp caracterizado por uma mutação C>G no códon 1857 do exon 40 e uma mutação C>T -12 no intron 45 que é responsável pelo salto parcial do exon 46, essencial para o funcionamento montagem de dímeros /b sp.

RELATO DE CASO:

Aqui descrevemos quatro membros de uma família de ascendência do norte da Europa, na qual os membros tinham diferentes morfologias eritrocitárias, variando de HPP atípico a HE, normal e uma nova mutação Sp. A quantificação de proteínas de membrana de RBC do propositus com HPP não microcítica atípica revelou 48% de dímeros de espectrina (controle 10%) devido a um aumento acentuado no peptídeo I Sp de 74kD. Houve apenas uma ligeira diminuição na razão espectrina/banda 3, que se correlacionou com a morfologia normocítica. Havia também um peptídeo Sp anormal em 41kD sugerindo a presença de LELY. O sequenciamento de seu gene Sp revelou heterozigosidade para uma nova mutação no exon 2, códon 34: CGG->CCG (Arg>Pro) e heterozigosidade para LELY. Essas mutações também estavam presentes em seu irmão e filha que têm HE, enquanto outro filho, que tinha Arg34Pro, mas não LELY, confirmou repetidamente a morfologia normal.

Planejamos rastrear 11 outros membros da família com suspeita de HPP ou HE. Amostras de sangue serão obtidas e o seguinte será realizado:

1. Quantificação de proteínas de membrana de eritrócitos (RBC)
2. Extração de DNA do WBC e triagem para mutação da espectrina com enzimas de restrição (se necessário, sequenciaremos o gene da espectrina)
3. O teste de PCR quantitativo em tempo real será feito no RNA para avaliar a expressão do gene da espectrina
4. História, exame clínico, hemograma, química e esfregaço de sangue periférico

A quantificação de proteínas de membrana de hemácias será feita procurando o aumento anormal na quantidade de dímeros de espectrina em pacientes com HPP (controle 10%). Também examinaremos o DNA em busca de mutações conhecidas ou ainda não relatadas no gene da espectrina e correlacionaremos a expressão do gene da espectrina com o nível da proteína espectrina no RNA.

Nenhuma análise estatística será feita. Este é um estudo de observação projetado para correlacionar as características clínicas com os resultados dos testes mencionados acima.