De moleculaire anatomie van orale wondgenezing

ACHTERGROND:

Twee belangrijke eigenschappen onderscheiden het genezingsproces van mondslijmvlieswonden van die van de huid: snellere genezing en de afwezigheid van littekenvorming. Dit is opmerkelijk gezien de schijnbare overeenkomsten van de twee weefsels. Er zijn echter opvallende verschillen in de helende omgeving, zoals hydratatie, beschikbaarheid van groeifactoren, ontstekingsreactie en microbiële blootstelling. Kennis over de oorzakelijke bijdrage van elk van deze factoren aan de differentiële genezingsrespons van de twee epitheelcellen is grotendeels anekdotisch, en orale wondgenezing is over het algemeen slecht bestudeerd. Deze studie streeft naar een globale moleculaire definitie van orale wondgenezing in vergelijking met die van de huid. Het algemene doel zal zijn om de specifieke factoren te identificeren die een snelle en bijna littekenvrije genezing van het mondslijmvlies mogelijk maken. Identificatie van deze fysiologische en moleculaire determinanten zal wijdverbreide implicaties hebben voor de menselijke mondgezondheid. Het zou onder andere locaties bieden voor gerichte verkenning van procedures om de genezing van kritieke orale laesies, gevormd door trauma, chirurgie, bestralingstherapie, infectie en andere orale pathologieën, te versnellen die, indien onbehandeld, leiden tot blijvende invaliditeit en disfunctie . Bovendien kunnen routes en/of moleculen die in deze onderzoeken zijn geïdentificeerd en die snelle, littekenloze genezing mogelijk maken, worden overwogen voor toepassing op niet-orale mucosale plaatsen om genezing te bevorderen en lelijke littekens te minimaliseren, die ook de functionele integriteit van het weefsel kunnen aantasten.

Hypothesen:

• Er zijn significante verschillen in gen- en eiwitexpressie tussen wondgenezing in huid en mondslijmvlies.
• De rekrutering van ontstekingscellen geassocieerd met een grote opwaartse regulatie van ontstekingsgerelateerde genen, waaronder cytokines en chemokines, in de epitheelcellen van huidwonden kan deze verschillen verklaren.
• Er zijn specifieke genprogramma's die de aanwezigheid van significante littekens in huidweefsels kunnen verklaren, maar niet in het mondslijmvlies.

DOELSTELLINGEN:

Het algemene doel van dit voorstel voor een pilootstudie is het vaststellen van de genen- en eiwitexpressieprofielen tijdens de vroege stadia (1-6 dagen) van normaal herstel van orale wonden. Door deze profielen te vergelijken met die van huidwondgenezing, kunnen we mogelijk moleculen identificeren die exclusief zijn voor orale wondgenezing en die biomarkers van het genezingsproces kunnen vertegenwoordigen of kunnen dienen als nieuwe therapeutische doelen bij pathologische wondgenezing en kanker. Een specifieke hypothese die moet worden getest, is dat het expressieniveau van pro-inflammatoire gennetwerken door wondinfiltrerende keratinocyten het belangrijkste verschil vormt tussen de menselijke orale en cutane wondtranscriptomen. De specifieke hypothese is ontwikkeld op basis van gegevens die zijn verkregen uit onze recente complementaire onderzoeken naar genezing van orale en huidwonden bij dieren.

IN AANMERKING KOMEN:

Gezonde mannelijke vrijwilligers van 18 tot 40 jaar zullen aan deze studie deelnemen.

ONTWERP:

Monsters van het mondslijmvlies: Er wordt een steriele huidpons van 3 mm gebruikt om een ​​uniforme biopsie van volledige dikte te maken in het slijmvlies van de wang net boven het occlusale vlak. Op de dag van de biopsie (dag 1) worden cirkelvormige stukjes weefsel van ongeveer 2 mm diep verwijderd. Deze onderwerpen worden vervolgens willekeurig als volgt gegroepeerd:

Groep 1: er worden geen monsters meer genomen; foto's worden gemaakt op dag 3, 6, 9, 13 en 15 (zie tijdschema). Deze groep zal helpen bij het documenteren van het normale genezingsproces onder de omstandigheden van de huidige studie, inclusief het ontbreken van littekens in het gebied dat is geselecteerd voor de initiële wond in het mondslijmvlies in vergelijking met de huid.

Groep 2: op dag 3 wordt een tweede biopsie genomen, waarbij het gebied van de eerste biopsie wordt genomen met een steriele 5 mm pons, waarbij dezelfde procedure wordt gevolgd als beschreven voor dag 0; er worden foto's gemaakt volgens het schema dat is ingesteld in het tijdschema. Deze tweede biopsie maakt het mogelijk om het genezingsgebied te bemonsteren dat door de eerste biopsie is veroorzaakt. Door een ponsmaat twee millimeter breder te selecteren en een monster concentrisch met de eerste te nemen, kunnen we ervoor zorgen dat het betreffende gebied volledig wordt verwijderd.

Groep 3: een tweede biopsie wordt respectievelijk op dag 6 genomen op dezelfde manier als beschreven voor Groep 2; er worden foto's gemaakt volgens het tijdschema.

Huidmonsters: parallel aan de orale biopsieën, zullen huidbiopten van vergelijkbare grootte en diepte als de orale biopsie van dezelfde proefpersonen worden verkregen uit het okselgebied volgens hetzelfde schema en dezelfde procedure, inclusief een tweede biopsie voor groep 2 en 3.

Wonden worden gefotografeerd met een digitale camera en de genezing wordt gevolgd tijdens kliniekbezoeken volgens het bovenstaande schema. De uitgesneden weefsels worden in elk geval onmiddellijk op ijs in tweeën gedeeld; de helft van het monster wordt gefixeerd in 4% formaldehyde/PBS en ingebed in paraffine voor standaard histologie en immunohistochemie, en de resterende helft wordt in OCT-gevulde plastic basismallen geplaatst, snel ingevroren in vloeibare stikstof en opgeslagen bij 80 (Infinite )C tot verwerking voor genomische en proteomische analyse.