Anatomia molekularna gojenia się ran jamy ustnej

TŁO:

Dwie ważne właściwości odróżniają proces gojenia się ran błony śluzowej jamy ustnej od ran skóry: szybsze gojenie i brak powstawania blizn. Jest to niezwykłe, biorąc pod uwagę widoczne podobieństwa obu tkanek. Istnieją jednak wyraźne różnice w środowisku gojenia, takie jak nawodnienie, dostępność czynników wzrostu, odpowiedź zapalna i ekspozycja na drobnoustroje. Wiedza na temat przyczynowego wkładu każdego z tych czynników w zróżnicowaną odpowiedź na gojenie się dwóch nabłonków jest w większości anegdotyczna, a gojenie się ran w jamie ustnej zostało ogólnie słabo zbadane. Niniejsze badanie ma na celu przedstawienie globalnej molekularnej definicji gojenia się ran w jamie ustnej w porównaniu do gojenia się skóry. Ogólnym celem będzie identyfikacja konkretnych czynników, które umożliwiają szybkie i prawie wolne od blizn gojenie błony śluzowej jamy ustnej. Identyfikacja tych fizjologicznych i molekularnych uwarunkowań będzie miała szerokie implikacje dla zdrowia jamy ustnej człowieka. Zapewniłoby to między innymi miejsca do ukierunkowanej eksploracji procedur przyspieszających gojenie krytycznych zmian w jamie ustnej powstałych w wyniku urazu, zabiegu chirurgicznego, radioterapii, infekcji i innych patologii jamy ustnej, które nieleczone prowadzą do trwałej niepełnosprawności i dysfunkcji . Co więcej, szlaki i/lub cząsteczki zidentyfikowane w tych badaniach, które mogą ułatwić szybkie gojenie bez blizn, można rozważyć do zastosowania w miejscach błony śluzowej innej niż jama ustna, aby przyspieszyć gojenie i zminimalizować nieestetyczne blizny, które mogą również zagrozić funkcjonalnej integralności tkanki.

hipotezy:

• Istnieją znaczne różnice w ekspresji genów i białek między gojeniem się ran na skórze i błonie śluzowej jamy ustnej.
• Rekrutacja komórek zapalnych związana z dużą regulacją w górę genów związanych z zapaleniem, w tym cytokin i chemokin, w komórkach nabłonkowych ran skóry może wyjaśniać te różnice.
• Istnieją specyficzne programy genowe, które mogą wyjaśnić obecność znacznych blizn w tkankach skóry, ale nie w błonie śluzowej jamy ustnej.

CELE:

Ogólnym celem tej propozycji badania pilotażowego jest ustalenie profili ekspresji genów i białek podczas wczesnych etapów (1-6 dni) normalnej gojenia się ran jamy ustnej. Porównując te profile z profilami gojenia się ran skórnych, możemy być w stanie zidentyfikować cząsteczki przeznaczone wyłącznie do naprawy ran jamy ustnej, które mogą reprezentować biomarkery procesu gojenia lub służyć jako nowe cele terapeutyczne w patologicznym gojeniu się ran i raku. Jedną z konkretnych hipotez, które należy przetestować, jest to, że poziom ekspresji sieci genów prozapalnych przez keratynocyty naciekające ranę stanowi najbardziej znaczącą różnicę między ludzkimi transkryptomami ran ustnych i skórnych. Konkretna hipoteza została opracowana na podstawie danych uzyskanych z naszych ostatnich uzupełniających badań dotyczących gojenia ran jamy ustnej i skóry na zwierzętach.

UPRAWNIENIA:

Do badania zostaną włączeni zdrowi ochotnicy płci męskiej w wieku od 18 do 40 lat.

PROJEKT:

Próbki błony śluzowej jamy ustnej: Sterylny 3-milimetrowy stempel skórny zostanie użyty do wykonania jednolitej biopsji pełnej grubości błony śluzowej policzka tuż nad płaszczyzną okluzyjną. Okrągłe fragmenty tkanki o głębokości około 2 mm zostaną usunięte w dniu biopsji (dzień 1). Przedmioty te zostaną następnie losowo pogrupowane w następujący sposób:

Grupa 1: dalsze próbki nie będą pobierane; zdjęcia będą wykonywane w dniach 3, 6, 9, 13 i 15 (patrz Harmonogram). Ta grupa pomoże udokumentować prawidłowy proces gojenia w warunkach niniejszego badania, w tym brak blizny w obszarze wybranym do pierwotnej rany w błonie śluzowej jamy ustnej w porównaniu ze skórą.

Grupa 2: druga biopsja zostanie pobrana w dniu 3, która obejmie obszar pierwszej biopsji sterylnym stemplem 5 mm, zgodnie z tą samą procedurą, jak opisano dla dnia 0; zdjęcia będą wykonywane zgodnie z harmonogramem określonym w Harmonogramie. Ta druga biopsja umożliwi pobranie próbki obszaru gojenia indukowanego pierwszą biopsją. Wybierając rozmiar stempla o dwa milimetry szerszy i pobierając próbkę koncentrycznie do pierwszego, możemy zapewnić całkowite usunięcie obszaru zainteresowania.

Grupa 3: druga biopsja zostanie pobrana odpowiednio dnia 6, w podobny sposób jak opisano dla Grupy 2; zdjęcia będą wykonywane zgodnie z harmonogramem.

Próbki skóry: Równolegle z biopsjami jamy ustnej, biopsje skóry o podobnej wielkości i głębokości jak biopsja jamy ustnej od tych samych pacjentów będą pobierane z okolicy pachowej zgodnie z tym samym harmonogramem i procedurą, w tym drugą biopsją dla grup 2 i 3.

Rany zostaną sfotografowane aparatem cyfrowym, a proces gojenia będzie monitorowany podczas wizyt w klinice zgodnie z powyższym harmonogramem. Wycięte tkanki w każdym przypadku zostaną natychmiast przepołowione na lodzie; połowa próbki zostanie utrwalona w 4% formaldehydzie/PBS i osadzona w parafinie do standardowej histologii i immunohistochemii, a pozostała połowa zostanie umieszczona w plastikowych formach bazowych wypełnionych OCT, szybko zamrożona w ciekłym azocie i przechowywana w temperaturze 80 (nieskończona )C do czasu przetworzenia do analizy genomicznej i proteomicznej.