Den molekylære anatomi af oral sårheling

BAGGRUND:

To vigtige egenskaber adskiller helingsprocessen af ​​mundslimhindesår fra hudens: hurtigere heling og fravær af arvævsdannelse. Dette er bemærkelsesværdigt i betragtning af de tilsyneladende ligheder mellem de to væv. Der er dog fremtrædende forskelle i det helbredende miljø, såsom hydrering, tilgængelighed af vækstfaktorer, inflammatorisk respons og mikrobiel eksponering. Viden om det kausale bidrag fra hver af disse faktorer til den differentielle helingsrespons af de to epitel er for det meste anekdotisk, og oral sårheling er generelt blevet dårligt undersøgt. Denne undersøgelse søger at give en global molekylær definition af oral sårheling sammenlignet med hudens. Det overordnede mål vil være at identificere de specifikke faktorer, der muliggør hurtig og næsten arfri heling af mundslimhinden. Identifikation af disse fysiologiske og molekylære determinanter vil have udbredte implikationer for menneskers orale sundhed. Det ville blandt andet give steder for målrettet udforskning af procedurer til at fremskynde helingen af ​​kritisk størrelse orale læsioner dannet af traumer, kirurgi, strålebehandling, infektion og andre orale patologier, som, hvis de ikke behandles, fører til permanent invaliditet og dysfunktion. . Desuden kunne veje og/eller molekyler identificeret i disse undersøgelser, som kan lette hurtig heling uden ar, overvejes til påføring på ikke-orale slimhinder for at fremme heling og minimere grimme ar, hvilket også kan kompromittere vævets funktionelle integritet.

Hypoteser:

• Der er betydelige forskelle i gen- og proteinekspression mellem sårheling i hud og mundslimhinde.
• Rekrutteringen af ​​inflammatoriske celler forbundet med en stor opregulering af inflammationsassocierede gener, herunder cytokiner og kemokiner, i epitelcellerne i hudsår kan forklare disse forskelle.
• Der er specifikke genprogrammer, der kan forklare tilstedeværelsen af ​​betydelig ardannelse i hudvæv, men ikke i mundslimhinden.

MÅL:

Det overordnede formål med dette forslag til pilotundersøgelse er at etablere gen- og proteinekspressionsprofilerne i de tidlige stadier (1-6 dage) af normal oral sårreparation. Ved at sammenligne disse profiler med profilerne for kutan sårheling, kan vi muligvis identificere molekyler, der er eksklusive til oral sårreparation, som kan repræsentere biomarkører for helingsprocessen eller tjene som nye terapeutiske mål i patologisk sårheling og cancer. En specifik hypotese, der skal testes, er, at niveauet af ekspression af pro-inflammatoriske gennetværk af sårinfiltrerende keratinocytter udgør den mest signifikante forskel mellem de humane orale og kutane sårtranskriptomer. Den specifikke hypotese er udviklet ud fra data opnået fra vores nylige komplementære orale og hudsårhelingsundersøgelser hos dyr.

BETINGELSER:

Raske mandlige frivillige i alderen 18 til 40 vil blive tilmeldt denne undersøgelse.

DESIGN:

Mundslimhindeprøver: En steril 3 mm dermal punch vil blive brugt til at skabe ensartet, fuld tykkelse biopsi i slimhinden på kinden lige over okklusalplanet. Cirkulære stykker væv på ca. 2 mm dybde vil blive fjernet på biopsidagen (dag 1). Disse emner vil efterfølgende blive tilfældigt grupperet som følger:

Gruppe 1: Der vil ikke blive indsamlet yderligere prøver; billeder vil blive taget på dag 3, 6, 9, 13 og 15 (se tidsplan). Denne gruppe vil hjælpe med at dokumentere den normale helingsproces under betingelserne i denne undersøgelse, herunder manglen på skræmmedannelse i det område, der er valgt til det indledende sår i mundslimhinden sammenlignet med huden.

Gruppe 2: en anden biopsi vil blive taget på dag 3, som vil omfatte området af den første biopsi med steril 5 mm punch, efter samme procedure som beskrevet for dag 0; billeder vil blive taget i henhold til tidsplanen fastsat i tidsplanen. Denne anden biopsi vil muliggøre prøvetagning af det helbredende område fremkaldt af den første biopsi. Ved at vælge en hulstørrelse to millimeter bredere og tage en prøve koncentrisk til den første, kan vi sikre fuldstændig fjernelse af interesseområdet.

Gruppe 3: en anden biopsi vil blive taget på henholdsvis dag 6 på samme måde som beskrevet for gruppe 2; billeder vil blive taget i henhold til tidsplanen.

Hudprøver: Parallelt med de orale biopsier vil der blive taget hudbiopsier af samme størrelse og dybde som den orale biopsi fra de samme forsøgspersoner fra aksillærområdet efter samme tidsplan og procedure, inklusive en anden biopsi for gruppe 2 og 3.

Sår vil blive fotograferet med et digitalt kamera, og helingen overvåges ved klinikbesøg i henhold til skemaet ovenfor. Det udskårne væv vil i hvert tilfælde straks blive opdelt på is; halvdelen af ​​prøven vil blive fikseret i 4 % formaldehyd/PBS og indlejret i paraffin til standard histologi og immunhistokemi, og den resterende halvdel vil blive placeret i OCT-fyldte plastikbaseforme, flash-frosset i flydende nitrogen og opbevaret ved 80°C (uendelig )C indtil bearbejdet til genomisk og proteomisk analyse.