L'anatomia molecolare della guarigione delle ferite orali

SFONDO:

Due importanti proprietà distinguono il processo di cicatrizzazione delle ferite della mucosa orale da quello della pelle: guarigione più rapida e assenza di formazione di tessuto cicatriziale. Ciò è notevole date le apparenti somiglianze dei due tessuti. Esistono, tuttavia, notevoli differenze nell'ambiente di guarigione, come l'idratazione, la disponibilità di fattori di crescita, la risposta infiammatoria e l'esposizione microbica. La conoscenza del contributo causale di ciascuno di questi fattori alla risposta di guarigione differenziale dei due epiteli è per lo più aneddotica e la guarigione delle ferite orali è stata generalmente poco studiata. Questo studio cerca di fornire una definizione molecolare globale della guarigione delle ferite orali rispetto a quella della pelle. L'obiettivo generale sarà identificare i fattori specifici che consentono una guarigione rapida e quasi priva di cicatrici della mucosa orale. L'identificazione di questi determinanti fisiologici e molecolari avrà implicazioni diffuse per la salute orale umana. Tra l'altro, fornirebbe luoghi per l'esplorazione mirata di procedure per accelerare la guarigione di lesioni orali di dimensioni critiche formate da traumi, interventi chirurgici, radioterapia, infezioni e altre patologie orali che, se non trattate, portano a disabilità e disfunzioni permanenti . Inoltre, i percorsi e/o le molecole identificati in questi studi che possono facilitare una guarigione rapida e senza cicatrici potrebbero essere presi in considerazione per l'applicazione a siti della mucosa non orale per promuovere la guarigione e ridurre al minimo le cicatrici antiestetiche, che possono anche compromettere l'integrità funzionale del tessuto.

Ipotesi:

• Esistono differenze significative nell'espressione genica e proteica tra la guarigione delle ferite nella pelle e nella mucosa orale.
• Il reclutamento di cellule infiammatorie associato a un'ampia sovraregolazione di geni associati all'infiammazione, comprese citochine e chemochine, nelle cellule epiteliali delle ferite cutanee può spiegare queste differenze.
• Esistono programmi genetici specifici che possono spiegare la presenza di cicatrici significative nei tessuti cutanei ma non nella mucosa orale.

OBIETTIVI:

L'obiettivo generale di questa proposta di studio pilota è stabilire i profili di espressione genica e proteica durante le prime fasi (1-6 giorni) della normale riparazione della ferita orale. Confrontando questi profili con quelli della guarigione delle ferite cutanee, potremmo essere in grado di identificare molecole esclusive della riparazione delle ferite orali che potrebbero rappresentare biomarcatori del processo di guarigione o servire come nuovi bersagli terapeutici nella guarigione delle ferite patologiche e nel cancro. Un'ipotesi specifica da testare è che il livello di espressione delle reti geniche pro-infiammatorie da parte dei cheratinociti infiltranti la ferita costituisca la differenza più significativa tra i trascrittomi umani della ferita orale e cutanea. L'ipotesi specifica è stata sviluppata dai dati ottenuti dai nostri recenti studi complementari sulla guarigione delle ferite orali e cutanee negli animali.

ELEGGIBILITÀ:

Saranno arruolati in questo studio volontari maschi sani di età compresa tra 18 e 40 anni.

PROGETTO:

Campioni di mucosa orale: verrà utilizzato un punzone dermico sterile da 3 mm per creare una biopsia uniforme a tutto spessore nella mucosa della guancia appena sopra il piano occlusale. Pezzi circolari di tessuto di circa 2 mm di profondità verranno rimossi il giorno della biopsia (giorno 1). Questi soggetti saranno successivamente raggruppati casualmente come segue:

Gruppo 1: non verranno raccolti ulteriori campioni; le foto verranno scattate nei giorni 3, 6, 9, 13 e 15 (vedi orario). Questo gruppo aiuterà a documentare il normale processo di guarigione nelle condizioni del presente studio, inclusa la mancanza di cicatrici nell'area selezionata per la ferita iniziale nella mucosa orale rispetto alla pelle.

Gruppo 2: il giorno 3 verrà prelevata una seconda biopsia, che includerà l'area della prima biopsia con punzone sterile da 5 mm, seguendo la stessa procedura descritta per il giorno 0; le foto verranno scattate secondo il programma stabilito nell'Orario. Questa seconda biopsia consentirà di campionare l'area di guarigione indotta dalla prima biopsia. Selezionando un punzone più largo di due millimetri e prelevando un campione concentrico al primo, possiamo assicurare la completa rimozione dell'area di interesse.

Gruppo 3: una seconda biopsia verrà prelevata il giorno 6, rispettivamente, in modo simile a quanto descritto per il gruppo 2; le foto verranno scattate secondo l'orario.

Campioni di pelle: parallelamente alle biopsie orali, verranno ottenute biopsie cutanee di dimensioni e profondità simili alla biopsia orale degli stessi soggetti dalla regione ascellare seguendo lo stesso programma e procedura, inclusa una seconda biopsia per i gruppi 2 e 3.

Le ferite saranno fotografate con una fotocamera digitale e la guarigione monitorata durante le visite cliniche secondo il programma sopra. I tessuti asportati in ogni caso saranno immediatamente tagliati in due su ghiaccio; metà del campione sarà fissata in formaldeide al 4%/PBS e inclusa in paraffina per istologia standard e immunoistochimica, e la restante metà sarà collocata in stampi di base in plastica riempiti con OCT, congelati in azoto liquido e conservati a 80 (Infinite )C fino all'elaborazione per l'analisi genomica e proteomica.