Молекулярная анатомия заживления ран полости рта

ФОН:

Два важных свойства отличают процесс заживления ран слизистой оболочки полости рта от ран кожи: более быстрое заживление и отсутствие образования рубцовой ткани. Это замечательно, учитывая очевидное сходство двух тканей. Однако существуют заметные различия в среде заживления, такие как гидратация, доступность факторов роста, воспалительная реакция и микробное воздействие. Информация о причинном вкладе каждого из этих факторов в дифференциальную реакцию заживления двух эпителиев в основном носит эпизодический характер, а заживление ран в полости рта, как правило, плохо изучено. Это исследование направлено на то, чтобы дать глобальное молекулярное определение заживления ран в ротовой полости по сравнению с заживлением кожи. Общая цель будет состоять в том, чтобы определить конкретные факторы, которые обеспечивают быстрое заживление слизистой оболочки полости рта практически без образования рубцов. Идентификация этих физиологических и молекулярных детерминант будет иметь широкое значение для здоровья полости рта человека. Среди прочего, он предоставит возможности для целенаправленного изучения процедур для ускорения заживления поражений полости рта критических размеров, образовавшихся в результате травмы, хирургического вмешательства, лучевой терапии, инфекции и других оральных патологий, которые, если их не лечить, приводят к постоянной инвалидности и дисфункции. . Кроме того, пути и/или молекулы, выявленные в этих исследованиях, которые могут способствовать быстрому заживлению без образования рубцов, могут быть рассмотрены для применения на участках слизистой оболочки вне полости рта для ускорения заживления и сведения к минимуму неприглядных рубцов, которые также могут нарушить функциональную целостность ткани.

Гипотезы:

• Существуют значительные различия в экспрессии генов и белков при заживлении ран на коже и слизистой оболочке полости рта.
• Привлечение воспалительных клеток, связанное со значительной активацией генов, связанных с воспалением, включая цитокины и хемокины, в эпителиальных клетках кожных ран, может объяснить эти различия.
• Существуют специфические генные программы, которые могут объяснить наличие значительных рубцов в тканях кожи, но не в слизистой оболочке полости рта.

ЦЕЛИ:

Общая цель этого пилотного исследования состоит в том, чтобы установить профили экспрессии генов и белков на ранних стадиях (1-6 дней) нормального заживления ран в полости рта. Сравнивая эти профили с профилями заживления кожных ран, мы можем идентифицировать молекулы, предназначенные исключительно для заживления ран в ротовой полости, которые могут представлять собой биомаркеры процесса заживления или служить новыми терапевтическими мишенями при заживлении патологических ран и раке. Одна конкретная гипотеза, подлежащая проверке, заключается в том, что уровень экспрессии провоспалительных генных сетей кератиноцитами, инфильтрирующими рану, представляет собой наиболее существенное различие между транскриптомами ротовой полости и кожной раны человека. Конкретная гипотеза была разработана на основе данных, полученных в ходе наших недавних дополнительных исследований заживления пероральных и кожных ран у животных.

ПРИЕМЛЕМОСТЬ:

В исследование будут включены здоровые добровольцы мужского пола в возрасте от 18 до 40 лет.

ДИЗАЙН:

Образцы слизистой оболочки полости рта: Стерильный 3-мм дермальный перфоратор будет использоваться для создания однородной полнослойной биопсии слизистой оболочки щеки чуть выше окклюзионной плоскости. Круглые кусочки ткани глубиной примерно 2 мм будут удалены в день биопсии (день 1). Эти предметы впоследствии будут случайным образом сгруппированы следующим образом:

Группа 1: дальнейшие пробы не собираются; фотографии будут сделаны в дни 3, 6, 9, 13 и 15 (см. Расписание). Эта группа поможет задокументировать нормальный процесс заживления в условиях настоящего исследования, в том числе отсутствие рубцов в области, выбранной для первоначальной раны на слизистой оболочке полости рта по сравнению с кожей.

Группа 2: на 3-й день будет взята вторая биопсия, которая будет включать область первой биопсии со стерильным 5-мм перфоратором, следуя той же процедуре, что и для 0-го дня; снимки будут сделаны в соответствии с расписанием, установленным в расписании. Эта вторая биопсия позволит взять образец области заживления, вызванной первой биопсией. Выбирая размер пуансона на два миллиметра шире и беря образец, концентричный первому, мы можем гарантировать полное удаление интересующей области.

Группа 3: вторая биопсия будет взята на 6-й день, соответственно, таким же образом, как описано для группы 2; фотографии будут сделаны в соответствии с расписанием.

Образцы кожи: параллельно с биопсией полости рта биопсии кожи того же размера и глубины, что и биопсия полости рта, у тех же субъектов будут получены из подмышечной области в соответствии с тем же графиком и процедурой, включая повторную биопсию для групп 2 и 3.

Раны будут фотографироваться с помощью цифровой камеры, а заживление будет контролироваться во время визитов в клинику в соответствии с приведенным выше графиком. Вырезанные ткани в каждом случае будут немедленно разделены пополам на льду; половина образца будет зафиксирована в 4% формальдегиде/PBS и залита парафином для стандартной гистологии и иммуногистохимии, а оставшаяся половина будет помещена в пластиковые формы с заполнением ОКТ, мгновенно заморожена в жидком азоте и храниться при температуре 80 (бесконечное )C до обработки для геномного и протеомного анализа.