Molekulární anatomie hojení ran v dutině ústní

POZADÍ:

Dvě důležité vlastnosti odlišují proces hojení ran ústní sliznice od těch kožních: rychlejší hojení a absence tvorby jizevnaté tkáně. To je pozoruhodné vzhledem ke zjevné podobnosti obou tkání. Existují však výrazné rozdíly v hojivém prostředí, jako je hydratace, dostupnost růstového faktoru, zánětlivá reakce a mikrobiální expozice. Znalosti o kauzálním příspěvku každého z těchto faktorů k rozdílné hojivé odpovědi dvou epitelů jsou většinou neoficiální a hojení ran v dutině ústní bylo obecně málo studováno. Tato studie se snaží poskytnout globální molekulární definici hojení ran v dutině ústní ve srovnání s kožními. Celkovým cílem bude identifikovat specifické faktory, které umožňují rychlé a téměř bezjizvené hojení ústní sliznice. Identifikace těchto fyziologických a molekulárních determinant bude mít rozsáhlé důsledky pro lidské orální zdraví. Mimo jiné by to poskytlo místa pro cílené zkoumání postupů k urychlení hojení kriticky velkých lézí v ústech vzniklých traumatem, chirurgickým zákrokem, radiační terapií, infekcí a jinými orálními patologiemi, které, pokud se neléčí, vedou k trvalé invaliditě a dysfunkci. . Kromě toho by cesty a/nebo molekuly identifikované v těchto studiích, které mohou usnadnit rychlé hojení bez jizev, mohly být zváženy pro aplikaci na neorální slizniční místa, aby se podpořilo hojení a minimalizovaly nevzhledné jizvy, které mohou také ohrozit funkční integritu tkáně.

hypotézy:

• Existují významné rozdíly v expresi genů a proteinů mezi hojením ran v kůži a ústní sliznici.
• Nábor zánětlivých buněk spojený s velkou up-regulací genů spojených se zánětem, včetně cytokinů a chemokinů, v epiteliálních buňkách kožních ran může odpovídat za tyto rozdíly.
• Existují specifické genové programy, které mohou vysvětlit přítomnost významného zjizvení v kožních tkáních, ale ne v ústní sliznici.

CÍLE:

Celkovým cílem tohoto návrhu pilotní studie je stanovit profily exprese genů a proteinů během raných fází (1-6 dnů) normálního hojení ran v dutině ústní. Porovnáním těchto profilů s profily hojení kožních ran můžeme být schopni identifikovat molekuly výhradně pro hojení ran v dutině ústní, které by mohly představovat biomarkery procesu hojení nebo sloužit jako nové terapeutické cíle při patologickém hojení ran a rakovině. Jedna konkrétní hypotéza, která má být testována, je, že úroveň exprese prozánětlivých genových sítí keratinocyty infiltrujícími ránu představuje nejvýznamnější rozdíl mezi lidskými orálními a kožními transkriptomy ran. Specifická hypotéza byla vyvinuta z dat získaných z našich nedávných doplňkových studií hojení ran v ústech a na kůži u zvířat.

ZPŮSOBILOST:

Do této studie budou zařazeni zdraví mužští dobrovolníci ve věku 18 až 40 let.

DESIGN:

Vzorky ústní sliznice: K vytvoření jednotné biopsie plné tloušťky ve sliznici tváře těsně nad okluzní rovinou se použije sterilní 3 mm dermální razník. Kruhové kousky tkáně o hloubce přibližně 2 mm budou odstraněny v den biopsie (den 1). Tyto subjekty budou následně náhodně seskupeny takto:

Skupina 1: nebudou odebírány žádné další vzorky; snímky budou pořízeny ve dnech 3, 6, 9, 13 a 15 (viz Jízdní řád). Tato skupina pomůže dokumentovat normální proces hojení za podmínek této studie, včetně chybějícího jiskření v oblasti vybrané pro počáteční ránu v ústní sliznici ve srovnání s kůží.

Skupina 2: 3. den bude odebrána druhá biopsie, která bude zahrnovat oblast první biopsie sterilním 5 mm děrovačem, podle stejného postupu, jaký je popsán pro den 0; snímky budou pořízeny podle harmonogramu stanoveného v Jízdním řádu. Tato druhá biopsie umožní odběr vzorků z hojení oblasti vyvolané první biopsií. Výběrem velikosti razníku o dva milimetry širší a odebráním vzorku soustředného k prvnímu můžeme zajistit úplné odstranění oblasti zájmu.

Skupina 3: druhá biopsie bude odebrána v den 6, v tomto pořadí, podobným způsobem, jak je popsáno pro skupinu 2; snímky budou pořízeny podle jízdního řádu.

Vzorky kůže: Souběžně s orálními biopsiemi budou odebrány kožní biopsie podobné velikosti a hloubky jako orální biopsie od stejných subjektů z axilární oblasti podle stejného plánu a postupu, včetně druhé biopsie pro skupiny 2 a 3.

Rány budou fotografovány digitálním fotoaparátem a hojení bude monitorováno při návštěvách kliniky podle výše uvedeného plánu. Vyříznuté tkáně budou v každém případě okamžitě rozpůleny na ledu; polovina vzorku bude fixována ve 4% formaldehydu/PBS a zalita do parafínu pro standardní histologii a imunohistochemii a zbývající polovina bude umístěna do plastových základních forem naplněných OCT, bleskově zmražena v kapalném dusíku a uložena při 80 °C (nekonečno )C až do zpracování pro genomickou a proteomickou analýzu.