A Anatomia Molecular da Cicatrização de Feridas Orais

FUNDO:

Duas propriedades importantes distinguem o processo de cicatrização das feridas da mucosa oral das da pele: cicatrização mais rápida e ausência de formação de tecido cicatricial. Isso é notável, dadas as aparentes semelhanças dos dois tecidos. Existem, no entanto, diferenças proeminentes no ambiente de cicatrização, como hidratação, disponibilidade de fator de crescimento, resposta inflamatória e exposição microbiana. O conhecimento sobre a contribuição causal de cada um desses fatores para a resposta de cicatrização diferencial dos dois epitélios é principalmente anedótico, e a cicatrização de feridas orais geralmente tem sido pouco estudada. Este estudo procura fornecer uma definição molecular global de cicatrização de feridas orais em comparação com a da pele. O objetivo geral será identificar os fatores específicos que permitem uma cicatrização rápida e quase sem cicatriz da mucosa oral. A identificação desses determinantes fisiológicos e moleculares terá amplas implicações para a saúde bucal humana. Entre outros, forneceria locais para a exploração direcionada de procedimentos para acelerar a cicatrização de lesões orais de tamanho crítico formadas por trauma, cirurgia, radioterapia, infecção e outras patologias orais que, se não tratadas, levam à incapacidade e disfunção permanentes . Além disso, vias e/ou moléculas identificadas nesses estudos que podem facilitar uma cicatrização rápida e sem cicatrizes podem ser consideradas para aplicação em locais não orais da mucosa para promover a cicatrização e minimizar cicatrizes inestéticas, que também podem comprometer a integridade funcional do tecido.

Hipóteses:

• Existem diferenças significativas na expressão de genes e proteínas entre a cicatrização de feridas na pele e na mucosa oral.
• O recrutamento de células inflamatórias associado a uma grande regulação positiva de genes associados à inflamação, incluindo citocinas e quimiocinas, nas células epiteliais de feridas cutâneas pode explicar essas diferenças.
• Existem programas gênicos específicos que podem explicar a presença de cicatrizes significativas nos tecidos da pele, mas não na mucosa oral.

OBJETIVOS:

O objetivo geral desta proposta de estudo piloto é estabelecer os perfis de expressão de genes e proteínas durante os estágios iniciais (1-6 dias) do reparo normal de feridas orais. Ao comparar esses perfis com os da cicatrização de feridas cutâneas, podemos identificar moléculas exclusivas do reparo de feridas orais que possam representar biomarcadores do processo de cicatrização ou servir como novos alvos terapêuticos na cicatrização de feridas patológicas e câncer. Uma hipótese específica a ser testada é que o nível de expressão de redes gênicas pró-inflamatórias por queratinócitos que se infiltram em feridas constitui a diferença mais significativa entre os transcriptomas orais e cutâneos de feridas humanas. A hipótese específica foi desenvolvida a partir de dados obtidos de nossos recentes estudos complementares de cicatrização de feridas orais e cutâneas em animais.

ELEGIBILIDADE:

Voluntários saudáveis ​​do sexo masculino com idade entre 18 e 40 anos serão incluídos neste estudo.

PROJETO:

Amostras da mucosa oral: Um perfurador dérmico estéril de 3 mm será usado para criar uma biópsia uniforme de espessura total na mucosa da bochecha logo acima do plano oclusal. Pedaços circulares de tecido de aproximadamente 2 mm de profundidade serão removidos no dia da biópsia (dia 1). Esses assuntos serão subsequentemente agrupados aleatoriamente da seguinte forma:

Grupo 1: não serão coletadas mais amostras; as fotos serão tiradas nos dias 3, 6, 9, 13 e 15 (ver Horário). Este grupo ajudará a documentar o processo de cicatrização normal nas condições do presente estudo, incluindo a ausência de cicatrização na área selecionada para a ferida inicial na mucosa oral em comparação com a pele.

Grupo 2: será realizada uma segunda biópsia no dia 3, que incluirá a área da primeira biópsia com punch estéril de 5 mm, seguindo o mesmo procedimento descrito para o dia 0; as fotos serão tiradas de acordo com o cronograma definido no Horário. Esta segunda biópsia permitirá a amostragem da área de cicatrização induzida pela primeira biópsia. Ao selecionar um tamanho de punção dois milímetros mais largo e obter uma amostra concêntrica à primeira, podemos garantir a remoção completa da área de interesse.

Grupo 3: uma segunda biópsia será feita no dia 6, respectivamente, de forma semelhante à descrita para o Grupo 2; as fotos serão tiradas de acordo com o Horário.

Amostras de pele: Paralelamente às biópsias orais, biópsias de pele de tamanho e profundidade semelhantes às da biópsia oral dos mesmos indivíduos serão obtidas da região axilar seguindo o mesmo cronograma e procedimento, incluindo uma segunda biópsia para os grupos 2 e 3.

As feridas serão fotografadas com uma câmera digital e a cicatrização monitorada nas visitas clínicas de acordo com o cronograma acima. Os tecidos extirpados em cada caso serão imediatamente cortados ao meio no gelo; metade da amostra será fixada em formaldeído a 4%/PBS e embebida em parafina para histologia padrão e imuno-histoquímica, e a outra metade será colocada em moldes de base de plástico preenchidos com OCT, congelados rapidamente em nitrogênio líquido e armazenados a 80 (Infinite )C até serem processados ​​para análise genômica e proteômica.