Analyse van genetische variaties bij patiënten met peri-implantitis

De studie zal worden uitgevoerd volgens de principes van de Verklaring van Helsinki (herzien in 2013). Er zullen passende maatregelen worden genomen voor de bescherming van patiëntgegevens. De studie werd goedgekeurd door de Wetenschappelijke Raad van het Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) op 3 juli 2019 en de goedkeuring van de ethische commissie van Egas Moniz werd ontvangen op 24 juli 2019. Er werd ook toestemming verkregen van de klinische directie van Egas Moniz Dental Clinic om onderzoekswerk uit te voeren in de kliniek van de universiteit.

De studie zal uit twee groepen bestaan, de eerste bestaat uit patiënten met peri-implantitis (bloeding en/of ettering bij sonderen, sondeerdiepte (PD) gelijk aan of groter dan 6 mm en botverlies gelijk aan of groter dan 3 mm) en de tweede groep (controlegroep) gevormd door patiënten met peri-implantaire gezondheid (peri-implantaire mucosa zonder ontstekingsverschijnselen en afwezigheid van peri-implantaat botverlies). De definitie van peri-implantitis en peri-implantaire gezondheid zal in overeenstemming zijn met de nieuwe classificatie van parodontale en peri-implantaire ziekten (American Academy of Periodontology (AAP) en European Federation of Periodontology (EFP) 2017)

Een peri-implantaatonderzoek (6 locaties met een CP12 gegradueerde parodontale sonde) en evaluatie van plaqueaccumulatie en gingiva-indexen (4 locaties) zullen zoals gebruikelijk worden uitgevoerd bij onderhoudsafspraken voor implantaten. De aanwezigheid van bloeding bij sonderen of pus zal ook worden beoordeeld. Er wordt een implantaatcontrole-röntgenfoto gemaakt in gevallen waarin er een sondeerdiepte van meer dan 6 mm is. Alle klinische gegevens worden verzameld door dezelfde onderzoeker. Voorafgaand aan het onderzoek zal een training en kalibratie worden uitgevoerd voor PD-metingen met patiënten die niet in het onderzoek zijn opgenomen.

Ook wordt de parodontale conditie van de patiënten beoordeeld. Om parodontale gezondheid te overwegen, moeten patiënten de volgende klinische kenmerken hebben: tot 10% van de locaties met bloeding bij sonderen, afwezigheid van erytheem en oedeem, afwezigheid van patiëntsymptomen, afwezigheid van klinisch hechtingsverlies en botverlies en PD < 3 mm (AAP en EFP 2017). Een patiënt is een geval van parodontitis als: interdentaal klinisch aanhechtingsverlies detecteerbaar is ten minste 2 niet-aangrenzende tanden, of buccaal of oraal klinisch aanhechtingsverlies >3 mm met pocketing >3 mm aantoonbaar is ten minste 2 tanden. De classificatie van parodontitis zal gebeuren op een multidimensionaal stadiërings- en beoordelingssysteem.

In het geval van een peri-implantaire gezondheidssituatie zullen plaquebestrijdingsmaatregelen worden genomen, terwijl in het geval van peri-implantitis de patiënt zal worden doorverwezen voor een specifieke behandelingsafspraak. In situaties van patiënten met meer dan één implantaat getroffen door peri-implantitis, zal degene met het grootste botverlies worden gekozen voor het onderzoek.

De genetische analyse zal worden uitgevoerd in het IUEM Molecular Biology Laboratory met de DNA-extractietechniek gevolgd door polymerasekettingreactie gevolgd door restrictiefragmentlengtepolymorfisme.

Voor de biochemische analyse worden de papieren stroken in de peri-implantaire sulcus/pocket gestoken totdat weerstand wordt gevoeld, en wordt 30 seconden gewacht voordat ze worden verwijderd. Visueel besmette monsters (bloed) worden weggegooid. Vervolgens worden papieren stroken op Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, NY, VS) geplaatst voor kwantificering van het verzamelde peri-implantaire creviculaire vloeistofvolume. De stroken papier worden vervolgens in Eppendorf-buisjes met filter geplaatst en bij -80 ºC ingevroren tot verzending naar de Universidad Complutense de Madrid. Op deze universiteit zal de concentratie van ontstekingsmediatoren IL-1 beta en TNF alfa worden geanalyseerd met behulp van multiplexed fluorescent sphere immunoassays met behulp van het Luminex® 100/200™-systeem en PGE2 met behulp van enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

De prevalentie van polymorfismen van de IL-1-gengroep bij patiënten met peri-implantitis en gezonde patiënten zal worden vergeleken door gebruik te maken van geschikte inferentiële statistische methodologieën (bivariate analyse/associatietests), rekening houdend met verschillende sociodemografische en klinische variabelen: rookstatus, geslacht, leeftijd en voorgeschiedenis van parodontitis. Gebaseerd op een gemiddelde effectgrootte (w=0,3), met 80% vermogen en een alfaniveau van 5%, werd de steekproefomvang voor deze studie berekend als n=88, dus n= 44 voor elke groep (peri-implantitis en peri-implantaire gezondheid). Verder zal een multivariabel regressie-logistiek model worden geconstrueerd om het effect van die covariabelen te evalueren en het risico te kwantificeren, door bepaling van de correspondent aangepaste Odds Ratio (OR), op de aanwezigheid van peri-implantitis. Bovendien zullen de niveaus van de inflammatoire responsmarkers IL-1 beta, PGE2 en TNF-alpha, aanwezig in de peri-implantaire creviculaire vloeistof, worden vergeleken tussen de groep patiënten met peri-implantitis en de patiënten met gezonde orale implantaten, waarbij rekening houden met de bovengenoemde variabelen, door gebruik te maken van geschikte methoden voor inferentiële statistiek (parametrische/niet-parametrische tests). Alle inferentiële analyses worden uitgevoerd op een significantieniveau van 5%.