Analiza zmienności genetycznej u pacjentów z zapaleniem tkanek wokół implantu

Badanie zostanie przeprowadzone zgodnie z zasadami Deklaracji Helsińskiej (zrewidowanej w 2013 r.). Zostaną podjęte odpowiednie środki w celu ochrony danych pacjentów. Badanie zostało zatwierdzone przez Radę Naukową Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) w dniu 3 lipca 2019 r., a zgodę Komisji Etyki Egas Moniz otrzymano w dniu 24 lipca 2019 r. Uzyskano również autoryzację Dyrekcji Klinicznej Kliniki Stomatologicznej Egas Moniz na prowadzenie prac badawczych w Klinice Uczelni.

Badanie będzie składało się z dwóch grup, pierwsza składająca się z pacjentów z peri-implantitis (krwawienie i/lub ropienie przy sondowaniu, głębokość sondowania (PD) równa lub większa niż 6 mm i utrata kości równa lub większa niż 3 mm) oraz druga grupa (grupa kontrolna) utworzona przez pacjentów zdrowych wokół implantu (błona śluzowa wokół implantu bez objawów zapalnych i bez ubytku kości wokół implantu). Definicja periimplantitis i periimplant health będzie zgodna z nową klasyfikacją chorób przyzębia i periimplantów (Amerykańska Akademia Periodontologii (AAP) i Europejska Federacja Periodontologii (EFP) 2017)

Badanie zgłębnikowe wokół implantu (6 miejsc za pomocą sondy periodontologicznej z podziałką CP12) oraz ocena gromadzenia się płytki nazębnej i wskaźników dziąseł (4 miejsca) zostaną przeprowadzone jak zwykle podczas wizyt konserwacji implantu. Ocenia się również obecność krwawienia z sondowania lub ropy. Kontrolne zdjęcie rentgenowskie implantu zostanie wykonane w przypadkach, gdy głębokość sondowania jest większa niż 6 mm. Wszystkie dane kliniczne będą zbierane przez tego samego egzaminatora. Przed badaniem zostanie przeprowadzone ćwiczenie szkoleniowe i kalibracyjne dla pomiarów PD z wykorzystaniem pacjentów nieobjętych badaniem.

Oceniany będzie również stan przyzębia pacjentów. Aby wziąć pod uwagę zdrowie przyzębia, pacjenci powinni mieć następującą charakterystykę kliniczną: do 10% miejsc z krwawieniem podczas sondowania, brak rumienia i obrzęku, brak objawów chorobowych pacjenta, brak klinicznej utraty przyczepu i utraty kości oraz PD < 3 mm (AAP i EFP 2017). Pacjent jest chory na zapalenie przyzębia, jeśli: kliniczna utrata przyczepu międzyzębowego jest wykrywalna na co najmniej 2 niesąsiadujących ze sobą zębach lub kliniczna utrata przyczepu na policzku lub w jamie ustnej > 3 mm z kieszonkami > 3 mm jest wykrywalna na co najmniej 2 zębach. Klasyfikacja zapalenia przyzębia zostanie przeprowadzona na podstawie wielowymiarowego systemu stopniowania i stopniowania.

W przypadku sytuacji zdrowotnej wokół implantu zostaną podjęte środki kontroli płytki nazębnej, natomiast w przypadku peri-implantitis pacjent zostanie skierowany na konkretną wizytę zabiegową. W przypadku pacjentów z więcej niż jednym implantem dotkniętym periimplantitis, do badania zostanie wybrany ten, u którego nastąpiła największa utrata masy kostnej.

Analiza genetyczna zostanie przeprowadzona w Laboratorium Biologii Molekularnej IUEM techniką ekstrakcji DNA, a następnie reakcji łańcuchowej polimerazy, a następnie polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych.

Do celów analizy biochemicznej paski papieru zostaną włożone do bruzdy/kieszonki wokół implantu do momentu wyczucia oporu, odczekując 30 sekund przed usunięciem. Wizualnie zanieczyszczone próbki (krew) zostaną odrzucone. Następnie paski papieru zostaną umieszczone na Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, NY, USA) w celu ilościowego określenia objętości płynu szczelinowego zebranego wokół implantu. Paski papieru zostaną następnie umieszczone w probówkach Eppendorfa z filtrem i zamrożone w temperaturze -80ºC do czasu wysyłki do Universidad Complutense de Madrid. Na tej uczelni stężenie mediatorów stanu zapalnego IL-1 beta i TNF alfa będzie analizowane za pomocą multipleksowanych fluorescencyjnych testów immunosferycznych z wykorzystaniem systemu Luminex® 100/200™ oraz PGE2 za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA).

Częstość występowania polimorfizmów grupy genów IL-1 u pacjentów z periimplantitis i zdrowych zostanie porównana przy użyciu odpowiednich metodologii statystyki inferencyjnej (analiza dwuwymiarowa/testy asocjacyjne), uwzględniających kilka zmiennych socjodemograficznych i klinicznych: palenie tytoniu, płeć, wiek i historia zapalenia przyzębia. W oparciu o średnią wielkość efektu (w=0,3), przy 80% mocy i 5% poziomie alfa wielkość próby dla tego badania została obliczona jako n=88, zatem n=44 dla każdej grupy (zapalenie okołoimplantowe i zdrowie wokół implantu). Ponadto zostanie skonstruowany wielowymiarowy model logistyczny regresji w celu oceny wpływu tych zmiennych towarzyszących i ilościowego określenia ryzyka, poprzez określenie odpowiednio skorygowanego ilorazu szans (OR), w kierunku obecności peri-implantitis. Dodatkowo porównane zostaną poziomy markerów odpowiedzi zapalnej IL-1 beta, PGE2 i TNF-alfa obecnych w płynie dziąsłowym okołowszczepowym pomiędzy grupą pacjentów z periimplantitis i pacjentami ze zdrowymi implantami ustnymi, biorąc uwzględniać ww. zmienne, stosując odpowiednie metodologie statystyki wnioskowania (testy parametryczne/nieparametryczne). Wszystkie analizy wnioskowania zostaną przeprowadzone na poziomie istotności 5%.