Analýza genetických variací u pacientů s periimplantitidou

Studie bude provedena podle zásad Helsinské deklarace (revidována v roce 2013). Budou přijata vhodná opatření na ochranu údajů pacientů. Studie byla schválena vědeckou radou Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) dne 3. července 2019 a schválení Etické komise společnosti Egas Moniz bylo přijato dne 24. července 2019. Povolení klinického ředitelství zubní kliniky Egas Moniz k provádění výzkumných prací na klinice univerzity také získalo.

Studie se bude skládat ze dvou skupin, z nichž první bude sestávat z pacientů s periimplantitidou (krvácení a/nebo hnisání při sondování, hloubka sondování (PD) rovná nebo větší než 6 mm a ztráta kosti rovná nebo větší než 3 mm) a druhá skupina (kontrolní skupina) tvořená pacienty s periimplantátovým zdravím (sliznice periimplantátu bez zánětlivých známek a absence periimplantátového úbytku kostní hmoty). Definice periimplantitidy a periimplantátového zdraví bude v souladu s novou klasifikací onemocnění parodontu a periimplantátu (Americká akademie parodontologie (AAP) a Evropská federace parodontologie (EFP) 2017)

Periplantátové sondážní vyšetření (6 míst s odstupňovanou periodontální sondou CP12) a hodnocení akumulace plaku a gingiválních indexů (4 místa) budou prováděny jako obvykle při schůzkách s údržbou implantátu. Bude také hodnocena přítomnost krvácení při sondování nebo hnisání. V případech, kdy je hloubka sondy větší než 6 mm, bude pořízen kontrolní rentgen implantátu. Všechna klinická data budou shromažďována stejným zkoušejícím. Před studií bude provedeno cvičné a kalibrační cvičení pro měření PD u pacientů, kteří nejsou zahrnuti do studie.

Hodnotí se také stav parodontu pacientů. Aby bylo možné vzít v úvahu stav parodontu, pacienti by měli mít následující klinické charakteristiky: až 10 % lokalizací s krvácením při sondování, nepřítomnost erytému a edému, nepřítomnost příznaků pacienta, nepřítomnost klinického úbytku úponu a ztráty kostní hmoty a PD < 3 mm (AAP a EFP 2017). Pacient je případ parodontitidy, pokud: ztráta mezizubního úponu je detekovatelná alespoň 2 nesousedící zuby, nebo klinická ztráta bukálního nebo ústního úponu > 3 mm s kapsováním > 3 mm je detekovatelná alespoň 2 zuby. Klasifikace parodontitidy bude provedena na vícerozměrném stagingu a klasifikačním systému.

V případě periimplantátové zdravotní situace budou přijata opatření pro kontrolu plaku, zatímco v případě periimplantitidy bude pacient odeslán ke konkrétnímu ošetření. V situacích pacientů s více než jedním implantátem postiženým periimplantitidou bude pro studii vybrán ten s největším úbytkem kostní hmoty.

Genetická analýza bude provedena v IUEM Molecular Biology Laboratory technikou extrakce DNA s následnou polymerázovou řetězovou reakcí následovanou polymorfismem délky restrikčních fragmentů.

Pro biochemickou analýzu budou papírové proužky vloženy do periimplantátového sulku/kapsy, dokud neucítíte odpor, počkejte 30 sekund, než se odstraní. Vizuálně kontaminované vzorky (krev) budou zlikvidovány. Následně budou papírové proužky umístěny na Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, NY, USA) pro kvantifikaci objemu odebrané periimplantátové crevikulární tekutiny. Proužky papíru budou poté umístěny do eppendorfových zkumavek s filtrem a zmraženy při -80ºC až do odeslání na Universidad Complutense de Madrid. Na této univerzitě bude koncentrace zánětlivých mediátorů IL-1 beta a TNF alfa analyzována pomocí multiplexních fluorescenčních kulových imunoanalýz za použití systému Luminex® 100/200™ a PGE2 pomocí enzymové imunoanalýzy (ELISA).

Prevalence polymorfismů genových skupin pro IL-1 u pacientů s periimplantitidou a zdravých pacientů bude porovnána pomocí vhodných metodologií inferenční statistiky (bivariační analýza/asociační testy), přičemž se vezme v úvahu několik sociodemografických a klinických proměnných: kouření, pohlaví, věk a historie parodontitidy. Na základě střední velikosti efektu (w=0,3), s 80% silou a 5% hladinou alfa byla velikost vzorku pro tuto studii vypočtena jako n=88, tedy n=44 pro každou skupinu (periimplantitida a periimplantátové zdraví). Dále bude zkonstruován multivariabilní regresní logistický model, aby bylo možné vyhodnotit účinek těchto kovariát a kvantifikovat riziko, prostřednictvím stanovení příslušného upraveného poměru šancí (OR), vůči přítomnosti periimplantitidy. Kromě toho budou porovnány hladiny markerů zánětlivé odpovědi IL-1 beta, PGE2 a TNF-alfa, přítomných v periimplantační štěrbinové tekutině, mezi skupinou pacientů s periimplantitidou a pacienty se zdravými ústními implantáty. zohlednit výše uvedené proměnné pomocí vhodných metodologií inferenční statistiky (parametrické/neparametrické testy). Všechny inferenční analýzy budou provedeny na 5% hladině významnosti.