Análise de Variações Genéticas em Pacientes com Peri-implantite

O estudo será conduzido de acordo com os princípios da Declaração de Helsinki (revisada em 2013). Medidas apropriadas serão tomadas para a proteção dos dados do paciente. O estudo foi aprovado pelo Conselho Científico do Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) em 3 de julho de 2019 e a aprovação do Comitê de Ética da Egas Moniz foi recebida em 24 de julho de 2019. Foi ainda obtida autorização da Direção Clínica da Clínica Dentária Egas Moniz para a realização de trabalhos de investigação na Clínica da Universidade.

O estudo será composto por dois grupos, o primeiro constituído por pacientes com peri-implantite (sangramento e/ou supuração à sondagem, profundidade de sondagem (PD) igual ou superior a 6mm e perda óssea igual ou superior a 3mm) e o segundo grupo (grupo controle) formado por pacientes com saúde peri-implantar (mucosa peri-implantar sem sinais inflamatórios e ausência de perda óssea peri-implantar). A definição de peri-implantite e saúde peri-implantar estará de acordo com a nova classificação de doenças periodontais e peri-implantares (Academia Americana de Periodontologia (AAP) e Federação Europeia de Periodontologia (EFP) 2017)

Um exame de sondagem peri-implantar (6 locais com uma sonda periodontal graduada CP12) e avaliação do acúmulo de placa e índices gengivais (4 locais) serão realizados como de costume nas consultas de manutenção do implante. A presença de sangramento à sondagem ou pus também será avaliada. Uma radiografia de controle do implante será realizada nos casos em que houver uma profundidade de sondagem superior a 6 mm. Todos os dados clínicos serão coletados pelo mesmo examinador. Antes do estudo, um exercício de treinamento e calibração será realizado para medições de DP usando pacientes não incluídos no estudo.

A condição periodontal dos pacientes também será avaliada. Para considerar a saúde periodontal, os pacientes devem ter as seguintes características clínicas: até 10% dos locais com sangramento à sondagem, ausência de eritema e edema, ausência de sintomas do paciente, ausência de perda clínica de inserção e perda óssea e PD < 3mm (AAP e EFP 2017). Um paciente é um caso de periodontite se: perda de inserção clínica interdental for detectável em pelo menos 2 dentes não adjacentes, ou perda de inserção clínica bucal ou oral > 3 mm com bolsas > 3 mm for detectável em pelo menos 2 dentes. A classificação da periodontite será feita em um sistema de classificação e estadiamento multidimensional.

No caso de uma situação de saúde peri-implantar, serão tomadas medidas de controle de placa, enquanto nos casos de peri-implantite o paciente será encaminhado para uma consulta de tratamento específico. Em situações de pacientes com mais de um implante acometido por peri-implantite, aquele com maior perda óssea será escolhido para o estudo.

A análise genética será realizada no Laboratório de Biologia Molecular do IUEM com a técnica de extração de DNA seguida de reação em cadeia da polimerase seguida de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição.

Para a análise bioquímica as tiras de papel serão inseridas no sulco/bolsa peri-implantar até sentir resistência, aguardando 30 segundos antes da retirada. Amostras visualmente contaminadas (sangue) serão descartadas. Posteriormente, tiras de papel serão colocadas no Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, NY, EUA) para quantificação do volume de fluido crevicular peri-implantar coletado. As tiras de papel serão então colocadas em tubos eppendorf com filtro e congeladas a -80ºC até o envio para a Universidad Complutense de Madrid. Nesta universidade, a concentração dos mediadores inflamatórios IL-1 beta e TNF alfa será analisada por meio de imunoensaios de esferas fluorescentes multiplexadas pelo sistema Luminex® 100/200™ e PGE2 por ensaio imunoenzimático (ELISA).

A prevalência de polimorfismos do grupo gênico IL-1 em pacientes com peri-implantite e saudáveis ​​será comparada por meio de metodologias estatísticas inferenciais apropriadas (análise bivariada/testes de associação), levando em consideração diversas variáveis ​​sociodemográficas e clínicas: tabagismo, sexo, idade e história de periodontite. Com base em um tamanho de efeito médio (w = 0,3), com poder de 80% e nível alfa de 5%, o tamanho da amostra para este estudo foi calculado como n=88, ou seja, n= 44 para cada grupo (periimplantite e saúde periimplantar). A seguir, será construído um modelo logístico de regressão multivariada para avaliar o efeito dessas covariáveis ​​e quantificar o risco, por meio da determinação da Odds Ratio (OR) ajustada correspondente, para a presença de peri-implantite. Adicionalmente, os níveis dos marcadores de resposta inflamatória IL-1 beta, PGE2 e TNF-alfa, presentes no fluido crevicular peri-implantar, serão comparados entre o grupo de pacientes com peri-implantite e os pacientes com implantes orais saudáveis, tomando ter em conta as variáveis ​​acima referidas, utilizando metodologias estatísticas inferenciais adequadas (testes paramétricos/não paramétricos). Todas as análises inferenciais serão realizadas a um nível de significância de 5%.