Анализ генетических вариаций у пациентов с периимплантитом

Исследование будет проводиться в соответствии с принципами Хельсинкской декларации (пересмотренной в 2013 г.). Будут приняты соответствующие меры для защиты данных пациентов. Исследование было одобрено Научным советом Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) 3 июля 2019 г., а одобрение Комитета по этике Egas Moniz было получено 24 июля 2019 г. Клиническое руководство стоматологической клиники Эгас Мониш также получило разрешение на проведение исследовательской работы в клинике университета.

Исследование будет состоять из двух групп, первая из которых состоит из пациентов с периимплантитом (кровотечение и/или нагноение при зондировании, глубина зондирования (PD) равна или больше 6 мм и потеря костной массы равна или больше 3 мм), а вторая группа (контрольная группа), сформированная из пациентов с периимплантатным здоровьем (слизистая оболочка вокруг имплантата без признаков воспаления и отсутствие потери костной массы вокруг имплантата). Определение периимплантита и здоровья периимплантата будет соответствовать новой классификации заболеваний пародонта и периимплантата (Американская академия пародонтологии (AAP) и Европейская федерация пародонтологии (EFP) 2017).

Периимплантатное зондирование (в 6 точках с помощью градуированного пародонтального зонда CP12) и оценка скопления зубного налета и десневых индексов (в 4 точках) будут выполняться, как обычно, во время профилактических осмотров имплантатов. Также будет оцениваться наличие кровотечения при зондировании или гноя. Контрольная рентгенограмма имплантата будет сделана в случаях, когда глубина зондирования превышает 6 мм. Все клинические данные будут собираться одним и тем же исследователем. Перед исследованием будет проведено обучение и калибровка измерений ЧР с использованием пациентов, не включенных в исследование.

Также будет оцениваться состояние пародонта пациентов. Для оценки состояния пародонта пациенты должны иметь следующие клинические характеристики: до 10 % участков с кровотечением при зондировании, отсутствие эритемы и отека, отсутствие симптомов пациента, отсутствие потери клинического прикрепления и потери костной ткани и PD < 3 мм (AAP и ЭФП 2017). Пациент считается больным пародонтитом, если: межзубная клиническая потеря прикрепления выявляется как минимум у 2 несмежных зубов или щечная или оральная клиническая потеря прикрепления >3 мм с карманами >3 мм выявляется не менее чем у 2 зубов. Классификация периодонтита будет проводиться по многомерной системе стадирования и классификации.

В случае проблем со здоровьем вокруг имплантата будут приняты меры по борьбе с зубным налетом, а в случае периимплантита пациент будет направлен на специальное лечение. В ситуациях, когда пациенты с более чем одним имплантатом поражены периимплантитом, для исследования будет выбран тот, у которого наибольшая потеря костной массы.

Генетический анализ будет проведен в Лаборатории молекулярной биологии ИУЭМ методом выделения ДНК с последующей полимеразной цепной реакцией с последующим полиморфизмом длин рестрикционных фрагментов.

Для биохимического анализа бумажные полоски будут вставлены в борозду/карман вокруг имплантата до тех пор, пока не почувствуется сопротивление, с ожиданием 30 секунд перед удалением. Визуально загрязненные образцы (кровь) будут утилизированы. Затем бумажные полоски будут помещены в Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, Нью-Йорк, США) для количественного определения объема собранной околоимплантатной борозды жидкости. Затем полоски бумаги помещают в пробирки Эппендорф с фильтром и замораживают при температуре -80ºC до отправки в Мадридский университет Комплутенсе. В этом университете концентрацию медиаторов воспаления IL-1 бета и TNF альфа будут анализировать с помощью мультиплексных иммуноферментных анализов с использованием флуоресцентных сфер с использованием системы Luminex® 100/200™ и PGE2 с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).

Распространенность полиморфизмов группы гена IL-1 у пациентов с периимплантитом и здоровых будет сравниваться с использованием соответствующих методологий логической статистики (двумерный анализ/ассоциативные тесты) с учетом нескольких социально-демографических и клинических переменных: статуса курения, пола, возраста. и пародонтит в анамнезе. Исходя из средней величины эффекта (w=0,3), при мощности 80% и уровне альфа 5% размер выборки для этого исследования был рассчитан как n = 88, таким образом, n = 44 для каждой группы (периимплантит и здоровье периимплантата). Кроме того, будет построена многопараметрическая регрессионная логистическая модель для оценки влияния этих сопутствующих переменных и количественной оценки риска путем определения соответствующего скорректированного отношения шансов (OR) в отношении наличия периимплантита. Кроме того, уровни маркеров воспалительного ответа IL-1 бета, PGE2 и TNF-альфа, присутствующих в периимплантатной борозде, будут сравниваться между группой пациентов с периимплантитом и пациентами со здоровыми оральными имплантатами, принимающими учитывать вышеупомянутые переменные, используя соответствующие методологии логической статистики (параметрические/непараметрические тесты). Весь выводной анализ будет выполняться на уровне значимости 5%.