Analisi delle variazioni genetiche nei pazienti con perimplantite

Lo studio sarà condotto secondo i principi della Dichiarazione di Helsinki (rivista nel 2013). Saranno adottate misure adeguate per la protezione dei dati dei pazienti. Lo studio è stato approvato dal consiglio scientifico dell'Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) il 3 luglio 2019 e l'approvazione del comitato etico di Egas Moniz è stata ricevuta il 24 luglio 2019. L'autorizzazione è stata ottenuta anche dalla Direzione Clinica della Clinica Odontoiatrica Egas Moniz per svolgere attività di ricerca presso la Clinica dell'Università.

Lo studio sarà composto da due gruppi, il primo costituito da pazienti con perimplantite (sanguinamento e/o suppurazione al sondaggio, profondità di sondaggio (PD) uguale o superiore a 6 mm e perdita ossea uguale o superiore a 3 mm) e il secondo gruppo (gruppo di controllo) formato da pazienti con salute perimplantare (mucosa perimplantare senza segni infiammatori e assenza di perdita ossea perimplantare). La definizione di perimplantite e salute perimplantare sarà conforme alla nuova classificazione delle malattie parodontali e perimplantari (American Academy of Periodontology (AAP) e European Federation of Periodontology (EFP) 2017)

Un esame di sondaggio perimplantare (6 posizioni con una sonda parodontale graduata CP12) e la valutazione dell'accumulo di placca e degli indici gengivali (4 posizioni) verranno eseguiti come di consueto durante gli appuntamenti di manutenzione dell'impianto. Verrà valutata anche la presenza di sanguinamento al sondaggio o pus. Una radiografia di controllo dell'impianto verrà eseguita nei casi in cui vi sia una profondità di sondaggio superiore a 6 mm. Tutti i dati clinici saranno raccolti dallo stesso esaminatore. Prima dello studio, verrà eseguito un esercizio di addestramento e calibrazione per misurazioni PD utilizzando pazienti non inclusi nello studio.

Verrà valutata anche la condizione parodontale dei pazienti. Per considerare la salute parodontale, i pazienti devono avere le seguenti caratteristiche cliniche: fino al 10% delle sedi con sanguinamento al sondaggio, assenza di eritema ed edema, assenza di sintomi del paziente, assenza di perdita clinica di attacco e perdita ossea e PD < 3 mm (AAP e EFP 2017). Un paziente è un caso di parodontite se: la perdita di attacco clinico interdentale è rilevabile almeno 2 denti non adiacenti, o la perdita di attacco clinico buccale o orale > 3 mm con tasche > 3 mm è rilevabile di almeno 2 denti. La classificazione della parodontite sarà effettuata su un sistema di stadiazione e classificazione multidimensionale.

In caso di situazione sanitaria perimplantare, verranno prese misure di controllo della placca, mentre nei casi di perimplantite il paziente verrà indirizzato per un appuntamento di trattamento specifico. In situazioni di pazienti con più di un impianto affetto da perimplantite, verrà scelto per lo studio quello con la maggiore perdita ossea.

L'analisi genetica sarà effettuata presso il Laboratorio di Biologia Molecolare IUEM con la tecnica dell'estrazione del DNA seguita dalla reazione a catena della polimerasi seguita dal polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione.

Per l'analisi biochimica le strisce di carta verranno inserite nel solco/tasca perimplantare fino a quando non si avverte resistenza, attendendo 30 secondi prima della rimozione. I campioni visivamente contaminati (sangue) verranno eliminati. Successivamente verranno posizionate strisce di carta su Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, NY, USA) per la quantificazione del volume del fluido crevicolare perimplantare raccolto. Le strisce di carta verranno quindi poste in provette eppendorf con filtro e congelate a -80ºC fino alla spedizione all'Universidad Complutense de Madrid. In questa università, la concentrazione dei mediatori dell'infiammazione IL-1 beta e TNF alfa sarà analizzata utilizzando saggi immunologici con sfera fluorescente multiplex utilizzando il sistema Luminex® 100/200™ e PGE2 mediante saggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA).

La prevalenza dei polimorfismi del gruppo genico IL-1 nei pazienti con perimplantite e nei pazienti sani sarà confrontata utilizzando opportune metodologie statistiche inferenziali (analisi bivariata/test di associazione), tenendo conto di diverse variabili sociodemografiche e cliniche: abitudine al fumo, sesso, età e storia di parodontite. Sulla base di una dimensione dell'effetto media (w=0,3), con una potenza dell'80% e un livello alfa del 5%, la dimensione del campione per questo studio è stata calcolata come n=88, quindi n= 44 per ciascun gruppo (periimplantite e salute perimplantare). Inoltre, verrà costruito un modello logistico di regressione multivariabile per valutare l'effetto di tali covariabili e quantificare il rischio, attraverso la determinazione del corrispondente Odds Ratio (OR) aggiustato, verso la presenza di perimplantite. Inoltre, i livelli dei marcatori di risposta infiammatoria IL-1 beta, PGE2 e TNF-alfa, presenti nel fluido crevicolare perimplantare, saranno confrontati tra il gruppo di pazienti con perimplantite e i pazienti con impianti orali sani, prendendo conto delle suddette variabili, utilizzando opportune metodologie statistiche inferenziali (test parametrici/non parametrici). Tutte le analisi inferenziali saranno eseguite a un livello di significatività del 5%.