Analyse af genetiske variationer hos patienter med peri-implantitis

Undersøgelsen vil blive udført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen (revideret i 2013). Der vil blive truffet passende foranstaltninger til beskyttelse af patientdata. Undersøgelsen blev godkendt af Instituto Universitário Egas Moniz (IUEM) Scientific Council den 3. juli 2019, og godkendelsen af ​​Egas Moniz' etiske komité blev modtaget den 24. juli 2019. Autorisation blev også opnået af den kliniske ledelse af Egas Moniz Dental Clinic til at udføre forskningsarbejde på universitetets klinik.

Undersøgelsen vil bestå af to grupper, den første bestående af patienter med peri-implantitis (blødning og/eller suppuration ved sondering, sonderingsdybde (PD) lig med eller større end 6 mm og knogletab lig med eller større end 3 mm) og den anden gruppe (kontrolgruppe) dannet af patienter med peri-implantat sundhed (periimplantat slimhinde uden inflammatoriske tegn og fravær af peri-implantat knogletab). Definitionen af ​​peri-implantitis og peri-implantat sundhed vil være i overensstemmelse med den nye klassifikation af periodontale og peri-implantatsygdomme (American Academy of Periodontology (AAP) og European Federation of Periodontology (EFP) 2017)

En peri-implantat sonderende undersøgelse (6 steder med en CP12 gradueret parodontal probe) og evaluering af plakakkumulering og gingivalindeks (4 steder) vil blive udført som sædvanligt ved implantatvedligeholdelsesaftaler. Tilstedeværelsen af ​​blødning ved sondering eller pus vil også blive vurderet. Et implantatkontrolrøntgenbillede vil blive taget i tilfælde, hvor der er en sonderingsdybde på mere end 6 mm. Alle kliniske data vil blive indsamlet af den samme undersøger. Forud for undersøgelsen vil der blive udført en trænings- og kalibreringsøvelse for PD-målinger med patienter, der ikke er inkluderet i undersøgelsen.

Patienternes periodontale tilstand vil også blive evalueret. For at tage hensyn til periodontal sundhed bør patienter have følgende kliniske karakteristika: op til 10 % af lokaliteterne med blødning ved sondering, fravær af erytem og ødem, fravær af patientsymptomer, fravær af klinisk tilknytningstab og knogletab og PD < 3 mm (AAP og EFP 2017). En patient er et tilfælde af paradentose, hvis: interdentalt klinisk tilknytningstab kan påvises mindst 2 ikke-tilstødende tænder, eller bukkalt eller oralt klinisk tilknytningstab >3 mm med lommer >3 mm kan påvises med mindst 2 tænder. Klassificeringen af ​​paradentose vil blive foretaget på et multidimensionelt iscenesættelses- og gradueringssystem.

Ved en peri-implantat helbredssituation vil der blive truffet plakbekæmpende foranstaltninger, mens patienten i tilfælde af peri-implantitis vil blive henvist til en specifik behandlingstid. I situationer med patienter med mere end ét implantat, der er ramt af peri-implantitis, vil den med det største knogletab blive valgt til undersøgelsen.

Den genetiske analyse vil blive udført på IUEM Molecular Biology Laboratory med DNA-ekstraktionsteknikken efterfulgt af polymerasekædereaktion efterfulgt af restriktionsfragmentlængdepolymorfi.

Til den biokemiske analyse vil papirstrimlerne blive indsat i peri-implantatets sulcus/lommen, indtil der mærkes modstand, og vente 30 sekunder før fjernelse. Visuelt forurenede prøver (blod) vil blive kasseret. Efterfølgende vil papirstrimler blive placeret på Periotron® 8000 (Periotron Ide-interstate, NY, USA) til kvantificering af det opsamlede peri-implantat crevikulære væskevolumen. Papirstrimlerne vil derefter blive placeret i eppendorf-rør med filter og frosset ved -80ºC indtil forsendelse til Universidad Complutense de Madrid. På dette universitet vil koncentrationen af ​​inflammatoriske mediatorer IL-1 beta og TNF alfa blive analyseret ved hjælp af multipleksede fluorescerende sfære-immunoassays ved hjælp af Luminex® 100/200™-systemet og PGE2 ved hjælp af enzym-linked immunosorbent assay (ELISA).

Forekomsten af ​​IL-1-gengruppepolymorfismer hos patienter med peri-implantitis og raske vil blive sammenlignet ved at bruge passende inferentielle statistiske metoder (bivariate analyse/associationstest), under hensyntagen til adskillige sociodemografiske og kliniske variabler: rygestatus, køn, alder og historie med paradentose. Baseret på en medium effektstørrelse (w=0,3), med 80 % kraft og et 5 % alfa-niveau blev stikprøvestørrelsen for denne undersøgelse beregnet til n=88, således n= 44 for hver gruppe (periimplantitis og peri-implantat sundhed). Yderligere vil en multivariabel regressionslogistisk model blive konstrueret for at evaluere effekten af ​​disse kovariabler og kvantificere risikoen, gennem bestemmelse af det korrespondentjusterede Odds Ratio (OR), mod tilstedeværelsen af ​​peri-implantitis. Derudover vil niveauerne af de inflammatoriske responsmarkører IL-1 beta, PGE2 og TNF-alpha, der er til stede i den peri-implantat crevikulære væske, blive sammenlignet mellem gruppen af ​​patienter med peri-implantitis og patienter med raske orale implantater, der tager tage højde for ovennævnte variabler ved at anvende passende inferentielle statistiske metoder (parametriske/ikke-parametriske test). Al inferentiel analyse vil blive udført ved et signifikansniveau på 5 %.