DARMMICROBIOTA BIJ KINDEREN MET AUTO-IMMUUN LEVERZIEKTE EN HET EFFECT DAT OP DE BEHANDELINGSRESPONS

Doel en doelstelling - Het vergelijken van de darmmicrobiota (dysbioseratio, alfa- en bètadiversiteit, Shannon-index) bij kinderen met auto-immuunziekte versus die met de ziekte van Wilson, en het bestuderen van de invloed ervan op de respons op behandeling bij kinderen met auto-immuunziekte.

(b) Methodologie:

• Onderzoekspopulatie: Ziektecohort: Kinderen met tekenen van chronische leverziekte met auto-immuunziekte Leverziekte en ziekte van Wilson (leverbetrokkenheid) jonger dan 18 jaar
• Controlecohort: op leeftijd afgestemde gezonde kinderen onder de 18 jaar met onderzoeksopzet: prospectief observationeel onderzoek
• Onderzoeksperiode: Vanaf het moment van ethische goedkeuring tot juni 2025

Ontlasting voor 16S r-RNA-sequencing: Er zullen verse ontlastingsmonsters worden verzameld van proefpersonen en controles. Ontlastingsmonsters worden bij het laboratorium afgeleverd in steriele plastic containers bij 4°C en bij -80°C bewaard tot verdere analyse. Het geamplificeerde DNA zal worden gesequenced in het volgende generatie sequencingplatform. Sequentiegegevens zouden worden verwerkt met behulp van een gestandaardiseerde analysepijplijn. In het kort zouden sequenties worden samengevoegd, ontdaan van streepjescodes, sequenties <150bp en die met dubbelzinnige basisoproepen zouden worden verwijderd. Sequenties zouden worden ontdaan van ruis, operationele taxonomische eenheden (OTU's) gegenereerd en hersenschimmen verwijderd. Het darmmicrobioom zal worden bestudeerd door middel van 'whole genome shotgun metagenomic sequencing' (WGSM). Door detectie van bacteriële genen voor metabolische spijsverteringsenzymen van aanwezige taxa, metabolische capaciteiten en potentiële productie van metabolieten door het darmmicrobioom zal worden voorspeld. Sequenties zouden worden gedenomisch, operationele taxonomische eenheden (OTU's) gegenereerd en hersenschimmen verwijderd. Het darmmicrobioom zal worden bestudeerd door middel van 'whole genome shotgun metagenomic sequencing' (WGSM). Door detectie van bacteriële genen voor metabolische spijsverteringsenzymen van taxa aanwezig, metabolische capaciteiten en potentiële productie van metabolieten door het darmmicrobioom zullen voorspeld worden.

• Monitoring en beoordeling: kinderen met tekenen van chronische leverziekte met auto-immuunziekte en de ziekte van Wilson (betrokkenheid van de lever) zullen worden opgenomen Controlecohort: leeftijd, geslacht en sociaal-economische status matchen gezonde kinderen onder de 18 jaar met TNF-alfa , IL-6, plasma-endotoxine, CRP, procalcitonine, duodenale aspiraat voor kweek om bacteriële overgroei te identificeren. Er zullen ontlastingsmonsters worden verzameld bij aanvang van de behandeling bij patiënten met AILD-, Wilson- en gezonde controles. Bij AILD-patiënten zal worden gestart met de behandeling met prednisolon 1 mg/kg/dag samen met azathioprine 1 mg/kg/dag. Er zullen ontlastingsmonsters van hen worden verzameld op Aan het einde zie je de reactie op immunosuppressie. Moeilijk te behandelen AILD (wat zal worden gedefinieerd als het niet binnen 1,5 keer normaliseren van AST/ALT of het niet normaliseren van IgG binnen 6 maanden. )

STATISTISCHE ANALYSE:

• De categorische en continue variabelen worden respectievelijk uitgedrukt als frequenties en gemiddelde of mediaan ±SD. Voor de beoordeling van de causaliteit zullen de Chi-kwadraattoets en de Student's t-toets (Fisher's exact toets) worden toegepast. De correlatie tussen 2 continue variabelen zal worden beoordeeld volgens de Spearman-correlatie. Statistische significantie zal worden vermeld als p-waarde <0,05, en Odd's ratio en 95% betrouwbaarheidsintervallen (95% BI). Voor metagenomische gegevens zullen we, bij gebrek aan een genencatalogus voor de onderzoekspopulatie, de metagenomische gegevens bestuderen in de eerste 10 AILD, 5 Wilson en 5 controles.