MICROBIOTA INTESTINAL EN NIÑOS CON ENFERMEDAD HEPÁTICA AUTOINMUNE Y SU EFECTO SOBRE LA RESPUESTA AL TRATAMIENTO

Finalidad y objetivo: comparar la microbiota intestinal (relación de disbiosis, diversidad alfa y beta, índice de Shannon) en niños con enfermedad hepática autoinmune versus aquellos con enfermedad de Wilson, y estudiar su influencia en la respuesta al tratamiento en niños con enfermedad hepática autoinmune.

(b) Metodología:

• Población de estudio: Cohorte de enfermedad: Niños con evidencia de enfermedad hepática crónica con enfermedad hepática autoinmune y enfermedad de Wilson (afectación hepática) menores de 18 años.
• Cohorte de control: Niños sanos menores de 18 años de la misma edad con Diseño del estudio: Estudio observacional prospectivo
• Período de estudio: Desde el momento de la aprobación Ética hasta junio de 2025.

Heces para secuenciación de 16S r-RNA: se recolectarán muestras de heces frescas de los sujetos del estudio y los controles. Las muestras de heces se entregarán al laboratorio en recipientes de plástico esterilizados a 4 ° C y se almacenarán a -80 ° C hasta su posterior análisis. El ADN amplificado se secuenciará en la plataforma de secuenciación de próxima generación. Los datos de la secuencia se procesarían mediante un proceso de análisis estandarizado. Brevemente, las secuencias se unirían, se eliminarían los códigos de barras, las secuencias <150 pb y se eliminarían aquellas con llamadas de base ambiguas. Se eliminarán las secuencias, se generarán unidades taxonómicas operativas (OTU) y se eliminarán las quimeras. El microbioma intestinal se estudiará mediante secuenciación metagenómica de escopeta del genoma completo (WGSM). Mediante la detección de genes bacterianos para las enzimas digestivas metabólicas de los taxones presentes, las capacidades metabólicas y la producción potencial de metabolitos. Se pronosticará la acción del microbioma intestinal. Se eliminarán el ruido de las secuencias, se generarán unidades taxonómicas operativas (OTU) y se eliminarán las quimeras. El microbioma intestinal se estudiará mediante secuenciación metagenómica de escopeta del genoma completo (WGSM). Mediante la detección de genes bacterianos para enzimas digestivas metabólicas de taxones presentes, se predecirán las capacidades metabólicas y la producción potencial de metabolitos por parte del microbioma intestinal.

• Monitoreo y evaluación: se incluirán niños con evidencia de enfermedad hepática crónica con enfermedad hepática autoinmune y enfermedad de Wilson (afectación hepática). Cohorte de control: edad, sexo y nivel socioeconómico emparejados con niños sanos menores de 18 años con TNF-alfa. , IL-6, endotoxina plasmática, PCR, procalcitonina, aspirado duodenal para cultivo para identificar el crecimiento excesivo de bacterias. Se recolectarán muestras de heces al inicio del estudio en pacientes con AILD, Wilson y controles sanos. Los pacientes con AILD comenzarán el tratamiento con prednisolona 1 mg/kg/día junto con azatioprina 1 mg/kg/día y se recolectarán muestras de heces de ellos al al final se ve la respuesta a la inmunosupresión AILD difícil de tratar (que se definirá No normalizar AST/ALT en 1,5 veces o no normalizar IgG en 6 meses). )

ANÁLISIS ESTADÍSTICO:

• Las variables categóricas y continuas se expresarán como frecuencias y media o mediana ±DE, respectivamente. Se aplicará la prueba de chi-cuadrado y la prueba t de Student (prueba exacta de Fisher) para evaluar la causalidad. La correlación entre 2 variables continuas se evaluará según la correlación de Spearman. La significación estadística se mencionará como valor de p <0,05, índice de Odd e intervalos de confianza del 95% (IC del 95%). Para los datos metagenómicos, en ausencia de un catálogo de genes para la población de estudio, estudiaremos los datos metagenómicos en los primeros 10 AILD, 5 Wilson y 5 controles,].