MICROBIOTA INTESTINALE NEI BAMBINI CON MALATTIA AUTOIMMUNE DEL FEGATO E SUO EFFETTO SULLA RISPOSTA AL TRATTAMENTO

Scopo e obiettivo - Confrontare il microbiota intestinale (rapporto disbiosi, diversità alfa e beta, indice di Shannon) nei bambini con malattia epatica autoimmune rispetto a quelli con malattia di Wilson e studiare la sua influenza sulla risposta al trattamento nei bambini con malattia epatica autoimmune.

(b) Metodologia:

• Popolazione in studio: Coorte di malattie: bambini con evidenza di malattia epatica cronica con malattia epatica autoimmune e malattia di Wilson (coinvolgimento epatico) di età inferiore a 18 anni
• Coorte di controllo: bambini sani di età inferiore a 18 anni con disegno dello studio: studio osservazionale prospettico
• Periodo di studio: Dal momento dell'approvazione etica a giugno 2025

Feci per il sequenziamento dell'r-RNA 16S: verranno raccolti campioni di feci fresche dai soggetti dello studio e dai controlli. I campioni di feci verranno consegnati al laboratorio in contenitori di plastica sterili a 4°C e conservati a -80°C fino a ulteriori analisi. Il DNA amplificato verrà sequenziato nella piattaforma di sequenziamento di prossima generazione. I dati della sequenza verrebbero elaborati utilizzando una pipeline di analisi standardizzata. In breve, le sequenze verrebbero unite, prive di codici a barre, le sequenze <150 bp e quelle con identificazioni di base ambigue verrebbero rimosse. Le sequenze verrebbero denoizzate, le unità tassonomiche operative (OTU) generate e le chimere rimosse. Il microbioma intestinale sarà studiato mediante sequenziamento metagenomico dell'intero genoma (WGSM). Rilevando i geni batterici per gli enzimi digestivi metabolici dei taxa presenti, le capacità metaboliche e la potenziale produzione di metaboliti dal microbioma intestinale. Le sequenze verrebbero denoizzate, le unità tassonomiche operative (OTU) generate e le chimere rimosse. Il microbioma intestinale sarà studiato mediante sequenziamento metagenomico del genoma intero (WGSM). Rilevando i geni batterici per gli enzimi digestivi metabolici di saranno previsti i taxa presenti, le capacità metaboliche e la potenziale produzione di metaboliti da parte del microbioma intestinale.

• Monitoraggio e valutazione: saranno inclusi bambini con evidenza di malattia epatica cronica con malattia epatica autoimmune e malattia di Wilson (coinvolgimento epatico). Coorte di controllo: età, sesso e stato socio-economico abbinati a bambini sani di età inferiore a 18 anni con TNF-alfa , IL-6, endotossina plasmatica, CRP, procalcitonina, aspirato duodenale per coltura per identificare la crescita eccessiva batterica. I campioni di feci verranno raccolti al basale nei pazienti con AILD, Wilson e controlli sani. I pazienti con AILD inizieranno il trattamento con Prednisolone 1 mg/kg/giorno insieme ad Azatioprina 1 mg/kg/giorno e i relativi campioni di feci verranno raccolti al alla fine si vede la risposta all’immunosoppressione Difficile da trattare l’AILD (che sarà definita Mancata normalizzazione di AST/ALT entro 1,5 volte o mancata normalizzazione delle IgG entro 6 mesi. )

ANALISI STATISTICA:

• Le variabili categoriche e continue saranno espresse rispettivamente come frequenze e media o mediana ±SD. Per la valutazione della causalità verranno applicati il ​​test chi-quadrato e il test t di Student (test esatto di Fisher). La correlazione tra 2 variabili continue sarà valutata secondo la correlazione di Spearman. La significatività statistica sarà menzionata come valore p <0,05, rapporto di dispari e intervalli di confidenza al 95% (IC al 95%). Per i dati metagenomici, in assenza di un catalogo genetico per la popolazione in studio, studieremo i dati metagenomici nei primi 10 AILD, 5 Wilson e 5 controlli,].