자가면역 간 질환이 있는 소아의 장내 미생물과 치료 반응에 미치는 영향

목표 및 목적 - 자가면역 간 질환이 있는 아동과 윌슨병이 있는 아동의 장내 미생물군(장내 세균총 불균형 비율, 알파 및 베타 다양성, 섀넌 지수)을 비교하고 자가면역 간 질환이 있는 아동의 치료에 대한 반응에 미치는 영향을 연구합니다.

(b) 방법론:

• 연구 집단:질병 코호트: 자가면역 간 질환 및 윌슨병(간 침범)을 동반한 만성 간 질환의 증거가 있는 18세 미만의 어린이
• 대조 코호트: 연령이 일치하는 18세 미만의 건강한 어린이 연구 설계:전향적 관찰 연구
• 연구기간 : 윤리적 승인일로부터 2025년 6월까지

16S r-RNA 시퀀싱을 위한 대변: 연구 대상자와 대조군으로부터 신선한 대변 샘플을 수집합니다. 대변 ​​샘플은 4°C에서 멸균 플라스틱 용기에 담아 실험실로 전달되며 추가 분석이 있을 때까지 -80°C에서 보관됩니다. 증폭된 DNA는 차세대 시퀀싱 플랫폼에서 시퀀싱됩니다. 서열 데이터는 표준화된 분석 파이프라인을 사용하여 처리됩니다. 간단히 말해서, 시퀀스가 ​​결합되고 바코드가 고갈되며 시퀀스가 ​​150bp 미만이고 모호한 기본 호출이 있는 시퀀스가 ​​제거됩니다. 서열의 잡음이 제거되고 작동 분류 단위(OTU)가 생성되고 키메라가 제거됩니다. 장내 미생물 군집은 전체 게놈 샷건 메타게놈 서열 분석(WGSM)으로 연구됩니다. 존재하는 분류군의 대사 소화 효소에 대한 박테리아 유전자의 검출, 대사 능력 및 대사 산물의 잠재적 생산 장내 미생물군집은 예측될 것입니다. 서열의 잡음이 제거되고 작동 분류 단위(OTU)가 생성되고 키메라가 제거됩니다. 장내 미생물군집은 전체 게놈 샷건 메타게놈 시퀀싱(WGSM)에 의해 연구됩니다. 대사 소화 효소에 대한 박테리아 유전자의 검출을 통해 분류군의 존재, 대사 능력 및 장내 미생물군집에 의한 대사산물의 잠재적 생산이 예측될 것입니다.

• 모니터링 및 평가: 자가면역 간 질환 및 윌슨병(간 침범)을 포함한 만성 간 질환의 증거가 있는 아동이 포함됩니다. 대조 집단: 연령, 성별 및 사회 경제적 상태가 TNF-알파와 일치하는 18세 미만의 건강한 아동 , IL-6, 혈장 내독소, CRP, 프로칼시토닌, 박테리아 과증식을 확인하기 위한 배양용 십이지장 흡인. 대변 ​​샘플은 AILD 환자, 윌슨 및 건강한 대조군에서 기준선에서 수집됩니다. AILD 환자는 아자티오프린 1mg/kg/일과 함께 프레드니솔론 1mg/kg/일 치료를 시작하고 이들의 대변 샘플은 다음에서 수집됩니다. 결국 면역억제에 대한 반응이 나타납니다. AILD 치료가 어렵습니다(이는 1.5배 이내에 AST/ALT를 정상화하지 못하거나 6개월 이내에 IgG를 정상화하지 못하는 것으로 정의됩니다. )

통계 분석:

• 범주형 변수와 연속형 변수는 각각 빈도와 평균 또는 중앙값 ±SD로 표시됩니다. 인과관계 평가를 위해 카이제곱 검정과 스튜던트 t-검정(Fisher's Exact Test)을 적용합니다. 2개의 연속 변수 사이의 상관관계는 Spearman의 상관관계에 따라 평가됩니다. 통계적 유의성은 p-값 <0.05, 홀수비 및 95% 신뢰 구간(95% CI)으로 언급됩니다. 메타게놈 데이터의 경우 연구 집단에 대한 유전자 카탈로그가 없는 경우 처음 10개의 AILD, 5개의 윌슨 및 5개의 대조군에서 메타게놈 데이터를 연구할 것입니다.]