Genekspresjonsprofilering i PBMC-er som et verktøy for å forutsi infliksimab-respons ved revmatoid artritt

Målet med studien er å identifisere og validere prediktive markører for infliksimab-respons hos RA-pasienter ved hjelp av 2 tilnærminger: i) måling av biokjemiske, immunologiske og benmarkører i sera på grunn av deres involvering i patogene mekanismer; ii) identifisere genuttrykkssignaturer i PBMC-er ved den transkriptomiske analysen.

Pasienter med aktiv RA (ACR-kriterier) ble gitt i.v. 3 mg/kg infliksimab assosiert med metotrexat i uke 0, 2, 6 og hver 8. uke. Effekten av infliksimab ble evaluert ved uke 14 ved å bruke EULAR-responskriteriene.

1. Rett før oppstart av infliksimab-behandling ble følgende parametere målt i sera: i) immunologiske tester: revmatoid faktor (IgA, IgG, IgM), anti-CCP, autoAb som gjenkjenner det 27 C-terminale fragmentet (ACAST-C27) og domene I (ACAST-DI) av calpastatin, anti-G6PI, anti-a-enolase, anti-keratin og anti-perinukleær faktor; ii) biokjemiske markører: CRP, MMP-1, MMP-3, TIMP-1, TIMP-2; markører for benresorpsjon: pyridinolin, deoksypyridinolin, osteoprotegerin, sRANKL, COMP. Den prediktive verdien av hver parameter for en respons/ikke-respons på infliksimab ble analysert ved hjelp av Fischers eksakte, Mann-Whitney og Chi2 tester.
2. En blodprøve ble tatt rett før starten av infliksimab-behandlingen og totalt RNA ble ekstrahert fra de mononukleære cellene i perifert blod. De [33P] radiomerkede mRNAene ble hybridisert (duplikat eller triplikat) over et sett med 10.000 humane cDNA-prober som ble oppdaget med høy tetthet på nylonmembraner. Data ble normalisert og filtrert for å tillate sammenligning mellom RNA-prøver. Statistiske analyser ble utført med R-programvaren og hierarkisk clustering ble utført med Cluster- og Tree View-programvarene.