Profilazione dell'espressione genica nelle PBMC come strumento per la previsione della reattività dell'infliximab nell'artrite reumatoide

L'obiettivo dello studio è identificare e convalidare i marcatori predittivi della risposta all'infliximab nei pazienti affetti da AR mediante 2 approcci: i) misurare i marcatori biochimici, immunologici e ossei nei sieri a causa del loro coinvolgimento nei meccanismi patogenetici; ii) identificare le firme di espressione genica nelle PBMC mediante l'analisi trascrittomica.

I pazienti con AR attiva (criteri ACR) sono stati somministrati i.v. 3 mg/kg di infliximab associato a metotrexato alle settimane 0, 2, 6 e ogni 8 settimane. L'efficacia di infliximab è stata valutata alla settimana 14, utilizzando i criteri di risposta EULAR.

1. Poco prima dell'inizio del trattamento con infliximab, nei sieri sono stati misurati i seguenti parametri: i) test immunologici: fattore reumatoide (IgA, IgG, IgM), anti-CCP, autoAb che riconoscono il frammento 27 C-terminale (ACAST-C27) e dominio I (ACAST-DI) di calpastatina, anti-G6PI, anti-enolasi, anti-cheratina e fattore anti-perinucleare; ii) marcatori biochimici: CRP, MMP-1, MMP-3, TIMP-1, TIMP-2; marcatori di riassorbimento osseo: piridinolina, deossipiridinolina, osteoprotegerina, sRANKL, COMP. Il valore predittivo di ciascun parametro per una risposta/non risposta a infliximab è stato analizzato utilizzando i test esatti di Fischer, Mann-Whitney e Chi2.
2. Un campione di sangue è stato raccolto appena prima dell'inizio del trattamento con infliximab e gli RNA totali sono stati estratti dalle cellule mononucleate del sangue periferico. Gli mRNA radiomarcati con [33P] sono stati ibridati (duplicati o triplicati) su un set di 10.000 sonde di cDNA umano individuate ad alta densità su membrane di nylon. I dati sono stati normalizzati e filtrati per consentire il confronto tra campioni di RNA. Le analisi statistiche sono state eseguite con il software R e il clustering gerarchico è stato eseguito con i software Cluster e Tree View.