Genuttrycksprofilering i PBMCs som ett verktyg för att förutsäga infliximab-respons vid reumatoid artrit

Syftet med studien är att identifiera och validera prediktiva markörer för infliximab-respons hos RA-patienter genom två metoder: i) mätning av biokemiska, immunologiska och benmarkörer i sera på grund av deras inblandning i patogena mekanismer; ii) identifiera genuttryckssignaturer i PBMC:er genom den transkriptomiska analysen.

Patienter med aktiv RA (ACR-kriterier) gavs i.v. 3 mg/kg infliximab i samband med metotrexat vid vecka 0, 2, 6 och var åttonde vecka. Infliximabs effekt utvärderades vecka 14, med hjälp av EULAR-svarskriterierna.

1. Strax före starten av infliximab-behandlingen mättes följande parametrar i sera: i) immunologiska tester: reumatoid faktor (IgA, IgG, IgM), anti-CCP, autoAb som känner igen det 27 C-terminala fragmentet (ACAST-C27) och domän I (ACAST-DI) av kalpastatin, anti-G6PI, anti-a-enolas, anti-keratin och anti-perinukleär faktor; ii) biokemiska markörer: CRP, MMP-1, MMP-3, TIMP-1, TIMP-2; markörer för benresorption: pyridinolin, deoxipyridinolin, osteoprotegerin, sRANKL, COMP. Det prediktiva värdet för varje parameter för ett svar/icke-svar på infliximab analyserades med Fischers exakta, Mann-Whitney- och Chi2-tester.
2. Ett blodprov togs strax innan infliximabbehandlingen påbörjades och totala RNA extraherades från de perifera mononukleära blodcellerna. De [33P]-radiomärkta mRNA:n hybridiserades (duplicerat eller tredubblat) över en uppsättning av 10 000 humana cDNA-prober fläckiga med hög densitet på nylonmembran. Data normaliserades och filtrerades för att möjliggöra jämförelse mellan RNA-prover. Statistiska analyser utfördes med programvaran R och hierarkisk klustring utfördes med programvaran Cluster och Tree View.