Studie av den beste blastocysten etter overføring av aCGH

Hypotesen om at preimplantasjonell aneuploidiscreening kan forbedre graviditetsraten etter prosedyrer IVF/ICSI er basert på to hovedårsaker: 1)50 % kromosomrisiko som eksisterer under befruktning i reproduktiv alder, øker med alderen og 2) beviset på at de fleste kromosomavvik blir spontanabortert. Derfor, for å oppmuntre til etablering av graviditet, overfører flertallet av reproduksjonssentrene minst to embryoer. Denne holdningen er imidlertid risikabel fordi den øker flere graviditeter med medisinske og sosiale ulemper.

Embryoseleksjon basert på morfologi og utviklingsgrad er ikke tilstrekkelig til å identifisere kromosomalt normalt embryo.

Erfaringene oppnådd de siste 10 årene med PGS ved bruk av FISH-teknikk har konkludert med at det ikke har noen klinisk verdi selv i utvalgte populasjoner med avansert morsalder, gjentatt svikt i IVF/ICSI, tilbakevendende abort eller alvorlig mannlig faktor. De tre hovedargumentene var: 1) begrensningen av teknikken for å telle opp de 24 kromosomene, 2) den reduserte evnen til implantasjon etter biopsi utført på den tredje dagen av in vitro-utviklingen og 3) kassering av embryoer som kunne ha vært selvtillit. -rettet opp.

Muligheten for å amplifisere hele genomet fra en eller to celler i embryoet tillater bruk av metoder for screening av 24 kromosomer, slik som sammenlignende genomisk hybridisering utført på metafaseplater (mCGH) eller på objektglass med tusenvis av prober tilsvarende humane kromosomsegmenter klonet i bakterier (BAC-array) eller en rekke enkeltnukleotidpolymorfismer (aSNP), foruten den klassiske eller sanntids-qPCR.

Andre viktige utviklinger inkluderer kulturen av pre-embryoer til blastocyststadiet. Dette gjør at flere celler kan oppnås og studeres ved klekking av trophectoderm, og effektiviteten oppnådd med forglasningen tillater overføring i en annen syklus, ustimulert, med bedre resultater enn fersk overføring. Disse to siste fakta er viktige, den første fra et praktisk synspunkt fordi studien er utført på et embryo som har nådd den høyeste graden av utvikling in vitro, og den andre fordi mottakelighet av endometrium er bedre i en ustimulert syklus, og det unngår også den potensielle iatrogene effekten av medisinene som brukes i eggstokkstimuleringssyklusen. På dette siste punktet er det interessant at funnene rapportert av det siste australske registeret om risikoen for fødselsskader etter reproduksjonsteknologi, viser at frekvensen av abnormiteter til de tinte embryoene ikke er forskjellig fra de som er født uten reproduksjonsteknologi, mens frekvensen av fødselsavvik med overføring av ferske embryoer er større enn de uten assistert reproduksjonsteknologi. Videre tillater ikke-embryooverføring i den friske syklusen mer tid til studier og implementering av forskjellige genetiske metoder som tidligere ikke kunne utføres på grunn av tidsbegrensninger. Dette nye alternativet gjør at vi kan organisere arbeidet bedre og åpenbart oppnå større effektivitet. Denne muligheten er svært viktig for genetikere som er villige til å jobbe hver dag når det er nødvendig. Tatt i betraktning de ovennevnte argumentene, foreslår vi å utføre embryobiopsien på par som krever IVF/ICSI på blastocyststadiet, den umiddelbare forglasningen av denne, og å overføre den beste blastocysten, evaluert av dens ekspansjon og kvaliteten på trophectoderm og indre celle. masse, i en påfølgende syklus med fysiologisk primet endometrium. Den molekylære karyotypen (aCGH) vil bli utført etter embryooverføringen. Resultatet av karyotypen til overførte embryoer vil bli bestemt når pasienten tar graviditetstesten. På denne måten vil vi kjenne andelen og typen av kromosomavvik hos tre grupper pasienter etter blastocystoverføring: a) de som ikke kunne bli gravide, b) de som ble gravide, men aborterte og c) de som lykkes med fødselen. Vi foreslår at denne prøvedesignen vil tillate ytterligere avklaring av den biologiske oppførselen til preimplantasjonelle aneuploider og for å vurdere om det virkelig har klinisk verdi. Dersom preimplantasjonskromosomavvik har klinisk verdi, bør andelen og typene av aneuploidier være forskjellig i de tre pasientgruppene nevnt ovenfor.

Vi vil tilby gratis fostervannsprøve til alle gravide kvinner for å bekrefte om fosterkaryotypen stemmer overens med trophectoderm, spesielt de som har hatt en aneuploid blastocystoverføring. De som nekter å bli vurdert prenatalt, vil testing bli foretatt ved levering via navlestrengsblod. Derimot vil pasientene som har abort, avhengig av svangerskapsalderen, bli tilbudt en studie av det aborterte produktet oppnådd ved curettage, korionvilluspunktur, fostervannsprøve eller fosterbiopsi.

Pasientene som ikke oppnådde graviditet eller som mistet den spontant på grunn av kromosomavvik, kan ha nytte av en påfølgende overføring med de gjenværende forglassede euploide embryoene eller med de som ble oppnådd under en ny stimuleringssyklus som utfører aCGH før overføring. Pasienter som oppnådde "ta en baby hjem" og som bestemmer seg for å få flere barn, kan også dra nytte av den gjenværende euploide avglassede blastocysten.

Vi foretrekker i denne kliniske studien å ikke overføre under den stimulerte syklusen fordi en pilotstudie, med ustimulert syklusoverføring, ga bedre resultater når det gjelder graviditetsrate sammenlignet med historiske data om PGD med fersk overføring. Andre nyere studier av devitrifisert blastocystoverføring i en naturlig syklus eller med endometrium fysiologisk tilberedt viser også bedre graviditetsrater og er dessuten mindre iatrogene enn fersk embryooverføring.

Hypotesen om embryonal aneuploidiscreening for å velge det beste embryoet er korrekt og støttes av publiserte data fra cytogenetiske studier på kjønnsceller og/eller menneskelige embryoer. Når paret produserer nok blastocyster av god kvalitet, er det fordelaktig å velge den euploide blastocysten for overføring, men hvis paret produserer bare én aneuploid blastocyst er vi ikke sikre på å forkaste den før vi er i stand til å demonstrere oppførselen til aneuploidier i preimplantasjonsperioden , spesielt hvis kromosomavviket som er funnet ikke er en del av patologien til den nyfødte, ellers ville vi eliminert siste sjanse for paret til å bli genetiske foreldre.

Vi tror at når den er demonstrert, kan den kliniske verdien av embryomolekylær karyotype og dens anvendelse være fordelaktig for å oppnå en bedre pågående graviditetsrate i utvalgte pasientgrupper som kvinner i avansert reproduktiv alder, tilbakevendende aborter og alvorlig mannlig faktor.