Studie des besten Blastozysten-Posttransfers durch aCGH

Die Hypothese, dass das präimplantative Aneuploidie-Screening die Schwangerschaftsrate nach IVF/ICSI-Verfahren verbessern könnte, basiert auf zwei Hauptgründen: 1) 50 % chromosomales Risiko, das während der Befruchtung im gebärfähigen Alter besteht, mit dem Alter zunimmt, und 2) dem Nachweis, dass die meisten Chromosomenanomalien auftreten werden spontan abgebrochen. Um die Etablierung einer Schwangerschaft zu fördern, werden daher in den meisten Reproduktionszentren mindestens zwei Embryonen übertragen. Diese Einstellung ist jedoch riskant, weil sie Mehrlingsschwangerschaften mit medizinischen und sozialen Nachteilen erhöht.

Die Embryonenauswahl anhand von Morphologie und Entwicklungsgrad reicht nicht aus, um einen chromosomal normalen Embryo zu identifizieren.

Die in den letzten 10 Jahren gesammelte Erfahrung mit PGS unter Verwendung der FISH-Technik hat ergeben, dass sie keinen klinischen Wert hat, selbst in ausgewählten Populationen mit fortgeschrittenem mütterlichem Alter, wiederholtem Versagen bei IVF/ICSI, wiederkehrenden Aborten oder schwerem männlichen Faktor. Die drei Hauptargumente waren: 1) die Einschränkung der Technik zur Zählung der 24 Chromosomen, 2) die reduzierte Implantationsfähigkeit nach der am dritten Tag der In-vitro-Entwicklung durchgeführten Biopsie und 3) das Verwerfen von Embryonen, die eigene Embryonen sein könnten -korrigiert.

Die Möglichkeit, das gesamte Genom aus einer oder zwei Zellen des Embryos zu amplifizieren, erlaubt die Verwendung von Methoden für das Screening von 24 Chromosomen, wie z. B. vergleichende genomische Hybridisierung, die auf Metaphaseplatten (mCGH) oder auf Objektträgern mit Tausenden von entsprechenden Sonden durchgeführt wird in Bakterien klonierte humane Chromosomensegmente (BAC-Array) oder Array von Single Nucleotide Polymorphisms (aSNP), neben der klassischen oder Echtzeit-qPCR.

Andere wichtige Entwicklungen umfassen die Kultur von Präembryonen bis zum Blastozystenstadium. Dadurch können beim Schlüpfen des Trophektoderms mehr Zellen gewonnen und untersucht werden, und die mit der Vitrifizierung erzielte Effizienz ermöglicht die Übertragung in einen anderen Zyklus, unstimuliert, mit besseren Ergebnissen als eine frische Übertragung. Diese letzten beiden Tatsachen sind wichtig, erstens aus praktischer Sicht, weil die Studie an einem Embryo durchgeführt wird, der in vitro den höchsten Entwicklungsgrad erreicht hat, und zweitens, weil die Empfänglichkeit des Endometriums in einem unstimulierten Zyklus besser ist. und es vermeidet auch die potenzielle iatrogene Wirkung der Medikamente, die im ovariellen Stimulationszyklus verwendet werden. In Bezug auf diesen letzten Punkt ist es interessant, dass die vom letzten australischen Register gemeldeten Ergebnisse über das Risiko von Geburtsfehlern nach reproduktiven Technologien zeigen, dass sich die Rate von Anomalien bei aufgetauten Embryonen nicht von denen unterscheidet, die ohne reproduktive Technologien geboren wurden, während die Rate der Geburtsanomalien mit dem Transfer frischer Embryonen ist größer als ohne assistierte Reproduktionstechnologien. Darüber hinaus ermöglicht der Nicht-Embryo-Transfer im frischen Zyklus mehr Zeit für das Studium und die Implementierung verschiedener genetischer Methoden, die zuvor aus Zeitgründen nicht durchgeführt werden konnten. Diese neue Option ermöglicht es uns, die Arbeit besser zu organisieren und natürlich eine höhere Effizienz zu erreichen. Diese Möglichkeit ist sehr wichtig für Genetiker, die bereit sind, jeden Tag zu arbeiten, wenn es nötig ist. In Anbetracht der oben genannten Argumente schlagen wir vor, bei Paaren, die IVF/ICSI benötigen, die Embryobiopsie im Blastozystenstadium und deren sofortige Vitrifikation durchzuführen und die beste Blastozyste zu übertragen, bewertet nach ihrer Ausdehnung und der Qualität des Trophektoderms und der inneren Zelle Masse, in einem anschließenden Zyklus mit physiologisch geprimtem Endometrium. Der molekulare Karyotyp (aCGH) wird nach dem Embryotransfer durchgeführt. Das Ergebnis des Karyotyps der übertragenen Embryonen wird bestimmt, wenn die Patientin den Schwangerschaftstest macht. Auf diese Weise werden wir den Anteil und die Art der Chromosomenanomalien in drei Gruppen von Patienten nach Blastozystentransfer kennen: a) diejenigen, die nicht schwanger werden konnten, b) diejenigen, die schwanger wurden, aber eine Fehlgeburt hatten, und c) diejenigen, die erfolgreich entbunden haben. Wir schlagen vor, dass dieses Studiendesign eine weitere Klärung des biologischen Verhaltens von Präimplantations-Aneuploidien ermöglicht und beurteilt, ob es wirklich einen klinischen Wert hat. Wenn Chromosomenanomalien vor der Implantation einen klinischen Wert haben, sollten Anteil und Art der Aneuploidien in den drei oben genannten Patientengruppen unterschiedlich sein.

Wir werden allen schwangeren Frauen die Amniozentese kostenlos anbieten, um zu bestätigen, ob der fetale Karyotyp mit dem Trophektoderm übereinstimmt, insbesondere denjenigen, die einen aneuploiden Blastozystentransfer hatten. Wer sich weigert, sich vorgeburtlich untersuchen zu lassen, wird zum Zeitpunkt der Entbindung mit Nabelschnurblut getestet. Im Gegensatz dazu wird den Patientinnen, die eine Fehlgeburt erlitten haben, je nach Gestationsalter eine Untersuchung des Abortprodukts angeboten, das durch Kürettage, Chorionzottenpunktion, Amniozentese oder fetale Biopsie gewonnen wird.

Die Patientinnen, die keine Schwangerschaft erreicht haben oder diese aufgrund einer Chromosomenanomalie spontan verloren haben, können von einem anschließenden Transfer mit den verbleibenden vitrifizierten euploiden Embryonen oder mit denjenigen profitieren, die während eines neuen Stimulationszyklus erhalten wurden, wobei die aCGH vor dem Transfer durchgeführt wird. Patienten, die „ein Baby mit nach Hause nehmen“ erreicht haben und sich entscheiden, mehr Kinder zu bekommen, können auch die verbleibende euploide devitrifizierte Blastozyste nutzen.

Wir ziehen es in dieser klinischen Studie vor, während des stimulierten Zyklus nicht zu transferieren, da eine Pilotstudie mit unstimuliertem Zyklustransfer bessere Ergebnisse in Bezug auf die Schwangerschaftsrate im Vergleich zu historischen Daten der PID mit frischem Transfer erbrachte. Andere neuere Studien zum Transfer devitrifizierter Blastozysten im natürlichen Zyklus oder mit physiologisch präpariertem Endometrium zeigen ebenfalls bessere Schwangerschaftsraten und sind zudem weniger iatrogen als der Transfer frischer Embryonen.

Die Hypothese des embryonalen Aneuploidie-Screenings zur Auswahl des besten Embryos ist richtig und wird durch die veröffentlichten Daten zytogenetischer Studien an Gameten und/oder menschlichen Embryonen gestützt. Wenn das Paar genügend Blastozysten von guter Qualität produziert, ist die Auswahl der euploiden Blastozyste für den Transfer vorteilhaft, aber wenn das Paar nur eine aneuploide Blastozyste produziert, sind wir nicht sicher, ob wir sie verwerfen, bis wir in der Lage sind, das Verhalten von Aneuploidien in der Präimplantationsperiode zu demonstrieren , insbesondere wenn die gefundene Chromosomenanomalie nicht Teil der Pathologie des Neugeborenen ist, da wir sonst die letzte Chance für das Paar, genetische Eltern zu werden, zunichte machen.

Wir glauben, dass der klinische Wert des embryonalen molekularen Karyotyps und seine Anwendung, sobald er demonstriert ist, von Vorteil sein könnten, um eine bessere anhaltende Schwangerschaftsrate in ausgewählten Patientengruppen wie Frauen im fortgeschrittenen reproduktiven Alter, wiederkehrenden Abtreibungen und schwerem männlichen Faktor zu erreichen.