Studie van de beste blastocyst na overdracht door aCGH

De hypothese dat pre-implantationele screening op aneuploïdie het zwangerschapspercentage na IVF/ICSI-procedures zou kunnen verbeteren, is gebaseerd op twee hoofdredenen: 1) 50% chromosomaal risico dat bestaat tijdens de bevruchting in de reproductieve leeftijd, neemt toe met de leeftijd en 2) het bewijs dat de meeste chromosoomafwijkingen worden spontaan afgebroken. Om het ontstaan ​​van de zwangerschap te bevorderen, plaatsen de meeste reproductieve centra daarom minstens twee embryo's terug. Deze houding is echter riskant omdat het leidt tot meerlingzwangerschappen met medische en sociale nadelen.

Embryoselectie op basis van morfologie en ontwikkelingsgraad is niet voldoende om chromosomaal normaal embryo te identificeren.

De ervaring die in de afgelopen 10 jaar is opgedaan met PGS met behulp van de FISH-techniek heeft geconcludeerd dat het geen klinische waarde heeft, zelfs niet bij geselecteerde populaties van gevorderde maternale leeftijd, herhaald falen bij IVF/ICSI, terugkerende abortus of ernstige mannelijke factor. De drie belangrijkste argumenten waren: 1) de beperking van de techniek om de 24 chromosomen op te sommen, 2) het verminderde implantatievermogen na biopsie uitgevoerd op de derde dag van de in vitro ontwikkeling en 3) het weggooien van embryo's die zelf hadden kunnen zijn. -gecorrigeerd.

De mogelijkheid om het volledige genoom van een of twee cellen van het embryo te amplificeren, maakt het gebruik van methodologieën mogelijk voor het screenen van 24 chromosomen, zoals vergelijkende genomische hybridisatie uitgevoerd op metafaseplaten (mCGH) of op objectglaasjes met duizenden sondes die overeenkomen met menselijke chromosoomsegmenten gekloond in bacteriën (BAC-array) of array van single-nucleotide polymorphisms (aSNP), naast de klassieke of real-time qPCR.

Andere belangrijke ontwikkelingen zijn de kweek van pre-embryo's tot het blastocyststadium. Hierdoor kunnen meer cellen worden verkregen en bestudeerd bij het uitkomen van het trophectoderm, en de efficiëntie die wordt bereikt met de vitrificatie maakt de overdracht in een andere cyclus mogelijk, ongestimuleerd, met betere resultaten dan verse overdracht. Deze laatste twee feiten zijn belangrijk, de eerste vanuit praktisch oogpunt omdat de studie wordt uitgevoerd op een embryo dat de hoogste graad van ontwikkeling in vitro heeft bereikt, en de tweede omdat de ontvankelijkheid van het endometrium beter is in een niet-gestimuleerde cyclus, en het vermijdt ook het potentiële iatrogene effect van de medicijnen die worden gebruikt in de ovariële stimulatiecyclus. Wat dit laatste punt betreft, is het interessant dat de bevinding gerapporteerd door het laatste Australische register over het risico op geboorteafwijkingen na voortplantingstechnologieën, aantoont dat het aantal afwijkingen van de ontdooide embryo's niet verschilt van die geboren zonder voortplantingstechnologie, terwijl het percentage van geboorteafwijkingen met terugplaatsing van verse embryo's is groter dan die zonder geassisteerde voortplantingstechnologieën. Bovendien biedt de niet-embryotransfer in de verse cyclus meer tijd voor studie en implementatie van verschillende genetische methodologieën die voorheen niet konden worden uitgevoerd vanwege tijdgebrek. Met deze nieuwe mogelijkheid kunnen we het werk beter organiseren en uiteraard efficiënter werken. Deze mogelijkheid is erg belangrijk voor genetici die bereid zijn elke dag te werken wanneer dat nodig is. Rekening houdend met de bovengenoemde argumenten, stellen we voor om bij koppels die IVF/ICSI nodig hebben, de embryobiopsie uit te voeren in het blastocyststadium, de onmiddellijke vitrificatie ervan, en de beste blastocyst over te brengen, beoordeeld op zijn expansie en de kwaliteit van het trophectoderm en de binnenste cel. massa, in een volgende cyclus met fysiologisch geprimed endometrium. Het moleculaire karyotype (aCGH) zal uitgevoerd worden na de embryotransfer. Het resultaat van het karyotype van teruggeplaatste embryo's wordt bepaald wanneer de patiënte de zwangerschapstest doet. Op deze manier zullen we de proportie en het type chromosomale afwijkingen kennen in drie groepen patiënten na blastocystoverdracht: a) degenen die niet zwanger konden worden, b) degenen die zwanger werden maar een miskraam kregen en c) degenen die met succes bevallen. We stellen voor dat deze proefopzet verdere verduidelijking van het biologische gedrag van pre-implantatie-aneuploïdieën mogelijk zal maken en om te beoordelen of het echt klinische waarde heeft. Als pre-implantatie chromosoomafwijkingen klinische waarde hebben, zouden het aandeel en de soorten aneuploïdieën verschillend moeten zijn in de drie hierboven genoemde groepen patiënten.

We zullen alle zwangere vrouwen gratis de vruchtwaterpunctie aanbieden om te bevestigen of het foetale karyotype consistent is met het trophectoderm, vooral degenen die een aneuploïde blastocystoverdracht hebben ondergaan. Degenen die weigeren prenataal te worden beoordeeld, zullen bij de bevalling worden getest via navelstrengbloed. Daarentegen zullen de patiënten die een miskraam hebben gehad, afhankelijk van de zwangerschapsduur, een studie aangeboden krijgen van het geaborteerde product verkregen door middel van curettage, chorionische villuspunctie, vruchtwaterpunctie of foetale biopsie.

De patiënten die geen zwangerschap hebben bereikt of die deze spontaan hebben verloren als gevolg van chromosoomafwijkingen, kunnen baat hebben bij een volgende transfer met de resterende verglaasde euploïde embryo's of met die verkregen tijdens een nieuwe stimulatiecyclus die de aCGH uitvoert vóór de transfer. Patiënten die "een baby mee naar huis nemen" hebben bereikt en die besluiten meer kinderen te krijgen, kunnen ook profiteren van de resterende euploïde gedevitrificeerde blastocyst.

In deze klinische studie geven we er de voorkeur aan om niet over te stappen tijdens de gestimuleerde cyclus omdat een pilootstudie, met niet-gestimuleerde cyclusovergang, betere resultaten opleverde in termen van zwangerschapspercentage in vergelijking met historische gegevens van PGD met verse overdracht. Andere recente onderzoeken naar de overdracht van ontglaasde blastocysten in een natuurlijke cyclus of met endometrium dat fysiologisch is geprepareerd, laten ook betere zwangerschapspercentages zien en zijn bovendien minder iatrogeen dan de overdracht van verse embryo's.

De hypothese van screening op embryonale aneuploïdie voor het selecteren van het beste embryo is correct en wordt ondersteund door de gepubliceerde gegevens van cytogenetische studies op gameten en/of menselijke embryo's. Wanneer het paar voldoende blastocysten van goede kwaliteit produceert, is de selectie van de euploïde blastocyst voor overdracht voordelig, maar als het paar slechts één aneuploïde blastocyst produceert, weten we niet zeker of we deze kunnen weggooien totdat we het gedrag van aneuploïdieën in de pre-implantatieperiode kunnen aantonen. , vooral als de gevonden chromosomale afwijking geen deel uitmaakt van de pathologie van de pasgeborene, anders zouden we de laatste kans voor het paar om genetische ouders te worden, elimineren.

Wij zijn van mening dat, eenmaal aangetoond, de klinische waarde van het embryo-moleculaire karyotype en de toepassing ervan gunstig zou kunnen zijn bij het bereiken van een hoger percentage doorgaande zwangerschappen bij geselecteerde patiëntengroepen, zoals vrouwen in een vergevorderde reproductieve leeftijd, terugkerende abortussen en ernstige mannelijke factor.