Undersøgelse af den bedste Blastocyst Post Transfer af aCGH

Hypotesen om, at præimplantationel aneuploidiscreening kan forbedre graviditetsraten efter procedurer IVF/ICSI er baseret på to hovedårsager: 1) 50 % kromosomal risiko, der eksisterer under befrugtning i den reproduktive alder, stiger med alderen og 2) beviset på, at de fleste kromosomafvigelser aborteres spontant. For at fremme etableringen af ​​graviditeten overfører størstedelen af ​​reproduktionscentrene derfor mindst to embryoner. Men denne holdning er risikabel, fordi den øger flerfoldsgraviditeter med medicinske og sociale ulemper.

Embryoselektion baseret på morfologi og udviklingsgrad er ikke tilstrækkelig til at identificere kromosomalt normalt embryo.

Erfaringerne opnået i de sidste 10 år med PGS ved hjælp af FISH-teknik har konkluderet, at det ikke har nogen klinisk værdi, selv i udvalgte populationer med fremskreden moderalder, gentagne fejl i IVF/ICSI, tilbagevendende abort eller alvorlig mandlig faktor. De tre hovedargumenter var: 1) begrænsningen af ​​teknikken til at opregne de 24 kromosomer, 2) den reducerede evne til implantation efter biopsi udført på den tredje dag af in vitro-udviklingen og 3) kassering af embryoner, der kunne have været selv -korrigeret.

Muligheden for at amplificere hele genomet fra en eller to celler i embryonet tillader brugen af ​​metoder til screening af 24 kromosomer, såsom komparativ genomisk hybridisering udført på metafaseplader (mCGH) eller på objektglas med tusindvis af prober svarende til humane kromosomsegmenter klonet i bakterier (BAC array) eller array af single nucleotid polymorphisms (aSNP), foruden den klassiske eller real-time qPCR.

Andre vigtige udviklinger inkluderer dyrkning af præ-embryoner til blastocyststadiet. Dette gør det muligt at opnå og studere flere celler, når trophectodermen udklækkes, og effektiviteten opnået med forglasningen tillader overførslen i en anden cyklus, ustimuleret, med bedre resultater end frisk overførsel. Disse to sidste kendsgerninger er vigtige, den første fra et praktisk synspunkt, fordi undersøgelsen udføres på et embryo, der har nået den højeste grad af udvikling in vitro, og det andet, fordi modtageligheden af ​​endometrium er bedre i en ustimuleret cyklus, og det undgår også den potentielle iatrogene virkning af de lægemidler, der anvendes i ovariestimuleringscyklus. Med hensyn til dette sidste punkt er det interessant, at resultaterne rapporteret af det sidste australske register om risikoen for fødselsdefekter efter reproduktionsteknologier viser, at frekvensen af ​​abnormiteter af de optøede embryoner ikke er forskellig fra dem, der er født uden reproduktionsteknologi, mens frekvensen af fødselsanomalier med overførsel af friske embryoner er større end dem uden assisteret reproduktionsteknologi. Ydermere tillader ikke-embryooverførsel i den friske cyklus mere tid til undersøgelse og implementering af forskellige genetiske metoder, som tidligere ikke kunne udføres på grund af tidsbegrænsninger. Denne nye mulighed giver os mulighed for at organisere arbejdet bedre og naturligvis opnå større effektivitet. Denne mulighed er meget vigtig for genetikere, der er villige til at arbejde hver dag, når det er nødvendigt. I betragtning af de ovennævnte argumenter foreslår vi at udføre embryobiopsien på par, der kræver IVF/ICSI på blastocyststadiet, den umiddelbare forglasning deraf, og at overføre den bedste blastocyst, evalueret ved dens ekspansion og kvaliteten af ​​trophectoderm og indre celle. masse, i en efterfølgende cyklus med fysiologisk primet endometrium. Den molekylære karyotype (aCGH) vil blive udført efter embryooverførsel. Resultatet af karyotypen af ​​overførte embryoner vil blive bestemt, når patienten tager graviditetstesten. På denne måde vil vi kende andelen og typen af ​​kromosomafvigelser i tre grupper af patienter efter blastocystoverførsel: a) dem, der ikke kunne blive gravide, b) dem, der blev gravide, men aborterede og c) dem, der med succes fødte. Vi foreslår, at dette forsøgsdesign vil muliggøre yderligere afklaring af den biologiske adfærd af præimplantationelle aneuploidier og at vurdere, om det virkelig har klinisk værdi. Hvis præimplantationskromosomabnormaliteter har klinisk værdi, bør andelen og typerne af aneuploidier være forskellige i de tre ovenfor nævnte grupper af patienter.

Vi vil tilbyde gratis fostervandsprøve til alle gravide kvinder for at bekræfte, om fosterets karyotype stemmer overens med trophectoderm, især dem, der har haft en aneuploid blastocystoverførsel. De, der nægter at blive vurderet prænatalt, vil blive testet på tidspunktet for fødslen via navlestrengsblod. Derimod vil de patienter, der har abort, afhængigt af svangerskabsalderen, blive tilbudt en undersøgelse af det aborterede produkt opnået ved curettage, chorionvilluspunktur, fostervandsprøve eller fosterbiopsi.

De patienter, som ikke opnåede graviditet, eller som mistede den spontant på grund af kromosomabnormitet, kan drage fordel af en efterfølgende overførsel med de resterende forglasset euploide embryoner eller med dem, der er opnået under en ny stimuleringscyklus, der udfører aCGH før overførsel. Patienter, der opnåede "tag en baby med hjem", og som beslutter sig for at få flere børn, kan også drage fordel af den resterende euploide afglaserede blastocyst.

Vi foretrækker i dette kliniske forsøg ikke at overføre under den stimulerede cyklus, fordi en pilotundersøgelse, med ustimuleret cyklusoverførsel, gav bedre resultater med hensyn til graviditetsrate sammenlignet med historiske data for PGD med frisk overførsel. Andre nyere undersøgelser af afglasset blastocystoverførsel i en naturlig cyklus eller med endometrium fysiologisk forberedt viser også bedre graviditetsrater og er desuden mindre iatrogene end den friske embryooverførsel.

Hypotesen om embryonal aneuploidiscreening for at udvælge det bedste embryo er korrekt og understøttes af de offentliggjorte data fra cytogenetiske undersøgelser af gameter og/eller menneskelige embryoner. Når parret producerer nok blastocyster af god kvalitet, er udvælgelsen af ​​den euploide blastocyst til overførsel fordelagtig, men hvis parret kun producerer én aneuploid blastocyst, er vi ikke sikre på at kassere den, før vi er i stand til at påvise adfærden af ​​aneuploidier i præimplantationsperioden , især hvis den fundne kromosomafvigelse ikke er en del af den nyfødtes patologi, ellers ville vi eliminere den sidste chance for parret for at blive genetiske forældre.

Vi mener, at den kliniske værdi af den embryomolekylære karyotype og dens anvendelse, når den først er påvist, kan være gavnlig til at opnå en bedre igangværende graviditetsrate i udvalgte patientgrupper såsom kvinder i fremskreden reproduktiv alder, tilbagevendende aborter og alvorlig mandlig faktor.