Studie nejlepšího přenosu blastocyst od aCGH

Hypotéza, že preimplantační screening aneuploidie by mohl zlepšit míru těhotenství po IVF/ICSI, je založena na dvou hlavních důvodech: 1) 50% chromozomální riziko, které existuje během oplodnění v reprodukčním věku, se zvyšuje s věkem a 2) důkaz, že většina chromozomových abnormalit jsou spontánně potraceny. Proto většina reprodukčních center přenáší alespoň dvě embrya, aby se podpořilo zahájení těhotenství. Tento postoj je však riskantní, protože zvyšuje vícečetná těhotenství se zdravotním a sociálním znevýhodněním.

Výběr embrya na základě morfologie a stupně vývoje není dostatečný k identifikaci chromozomálně normálního embrya.

Zkušenosti získané v posledních 10 letech s PGS pomocí techniky FISH dospěly k závěru, že nemá klinickou hodnotu ani u vybraných populací pokročilého věku matek, opakovaného selhání IVF/ICSI, recidivujících potratů nebo závažného mužského faktoru. Tři hlavní argumenty byly: 1) omezení techniky počítání 24 chromozomů, 2) snížená schopnost implantace po biopsii provedené třetí den vývoje in vitro a 3) vyřazení embryí, která mohla být vlastní -opraveno.

Možnost amplifikace celého genomu z jedné nebo dvou buněk embrya umožňuje použití metodik pro screening 24 chromozomů, jako je srovnávací genomová hybridizace prováděná na metafázových plotnách (mCGH) nebo na sklíčkách s tisíci sond odpovídajících segmenty lidských chromozomů klonované v bakteriích (BAC array) nebo řada jednonukleotidových polymorfismů (aSNP), kromě klasické nebo real time qPCR.

Mezi další důležité pokroky patří kultivace preembryí do stadia blastocysty. To umožňuje získat a studovat více buněk při líhnutí trofektodermu a účinnost dosažená vitrifikací umožňuje přenos v jiném cyklu, nestimulovaný, s lepšími výsledky než čerstvý přenos. Tyto dvě poslední skutečnosti jsou důležité, první z praktického hlediska, protože studie se provádí na embryu, které dosáhlo nejvyššího stupně vývoje in vitro, a druhý proto, že receptivita endometria je lepší v nestimulovaném cyklu, a také zabraňuje potenciálnímu iatrogennímu účinku léků používaných v cyklu stimulace vaječníků. V tomto posledním bodě je zajímavé, že zjištění posledního australského registru o riziku vrozených vad po reprodukčních technologiích ukazuje, že míra abnormalit rozmražených embryí se neliší od těch narozených bez reprodukční technologie, zatímco míra porodních anomálií při přenosu čerstvých embryí je větší než u těch bez technologií asistované reprodukce. Kromě toho přenos bez embryí v čerstvém cyklu umožňuje více času na studium a implementaci různých genetických metodologií, které dříve nebylo možné provést kvůli časovým omezením. Tato nová možnost nám umožňuje lépe organizovat práci a samozřejmě získat větší efektivitu. Tato možnost je velmi důležitá pro genetiky, kteří jsou ochotni pracovat každý den, když je to nutné. S ohledem na výše uvedené argumenty navrhujeme provést u párů, které vyžadují IVF/ICSI, biopsii embrya ve stádiu blastocysty, její okamžitou vitrifikaci a přenést nejlepší blastocystu hodnocenou její expanzí a kvalitou trofektodermu a vnitřní buňky. hmoty, v následném cyklu s fyziologicky aktivovaným endometriem. Po embryotransferu bude proveden molekulární karyotyp (aCGH). Výsledek karyotypu přenesených embryí bude stanoven, když si pacientka udělá těhotenský test. Budeme tak znát podíl a typ chromozomálních abnormalit u tří skupin pacientů po přenosu blastocysty: a) těch, které nemohly otěhotnět, b) těch, které otěhotněly, ale potratily a c) těch, které úspěšně porodily. Navrhujeme, aby tento design studie umožnil další objasnění biologického chování preimplantačních aneuploidií a posouzení, zda má skutečně klinickou hodnotu. Pokud mají preimplantační chromozomové abnormality klinickou hodnotu, podíl a typy aneuploidií by měly být u tří výše uvedených skupin pacientů různé.

Všem těhotným ženám zdarma nabídneme amniocentézu, abychom potvrdili, zda je karyotyp plodu v souladu s trofektodermem, zejména těm, které prodělaly přenos aneuploidní blastocysty. Těm, kteří odmítnou prenatální vyšetření, bude vyšetření provedeno v době porodu prostřednictvím pupečníkové krve. Naproti tomu pacientkám, které potratily, v závislosti na gestačním věku, bude nabídnuta studie abortu získaného kyretáží, punkcí choriových klků, amniocentézou nebo biopsií plodu.

Pacientky, které nedosáhly otěhotnění nebo otěhotněly spontánně kvůli chromozomové abnormalitě, mohou mít prospěch z následného transferu se zbývajícími vitrifikovanými euploidními embryi nebo s embryi získanými během nového stimulačního cyklu provádějícího aCGH před transferem. Pacienti, kteří dosáhli „vzít si domů dítě“ a kteří se rozhodli mít více dětí, mohou také využít zbývající euploidní devitrifikovanou blastocystu.

V této klinické studii preferujeme nepřenášet během stimulovaného cyklu, protože pilotní studie s přenosem nestimulovaného cyklu přinesla lepší výsledky, pokud jde o četnost těhotenství, ve srovnání s historickými údaji o PGD s čerstvým přenosem. Jiné nedávné studie přenosu devitrifikované blastocysty v přirozeném cyklu nebo s fyziologicky připraveným endometriem také ukazují lepší četnost těhotenství a kromě toho jsou méně iatrogenní než přenos čerstvého embrya.

Hypotéza screeningu embryonální aneuploidie pro výběr nejlepšího embrya je správná a je podpořena publikovanými daty cytogenetických studií na gametách a/nebo lidských embryích. Když pár produkuje dostatek blastocyst dobré kvality, je výběr euploidní blastocysty pro přenos výhodný, ale pokud pár produkuje pouze jednu aneuploidní blastocystu, nejsme si jisti, že ji vyřadíme, dokud nebudeme schopni prokázat chování aneuploidií v preimplantačním období. , zvláště pokud nalezená chromozomální abnormalita není součástí patologie novorozence, jinak bychom páru eliminovali poslední šanci stát se genetickými rodiči.

Domníváme se, že jakmile bude prokázána klinická hodnota molekulárního karyotypu embrya a jeho aplikace, může být přínosem pro dosažení lepší míry probíhajícího těhotenství u vybraných skupin pacientů, jako jsou ženy v pokročilém reprodukčním věku, opakované potraty a závažný mužský faktor.