Изучение лучшего постпереноса бластоцисты с помощью aCGH

Гипотеза о том, что преимплантационный скрининг на анеуплоидию может улучшить частоту наступления беременности после процедур ЭКО/ИКСИ, основана на двух основных причинах: 1) 50%-й хромосомный риск, существующий во время оплодотворения в репродуктивном возрасте, увеличивается с возрастом и 2) доказательства того, что большинство хромосомных аномалий самопроизвольно прерываются. Поэтому, чтобы способствовать установлению беременности, большинство репродуктивных центров переносят как минимум два эмбриона. Однако такое отношение рискованно, поскольку увеличивает количество многоплодных беременностей с неблагоприятными медицинскими и социальными последствиями.

Отбор эмбрионов на основе морфологии и степени развития недостаточен для идентификации хромосомно нормального эмбриона.

Опыт, полученный за последние 10 лет при проведении ПГС с использованием метода FISH, показал, что он не имеет клинической ценности даже в отдельных популяциях с пожилым материнским возрастом, повторными неудачами ЭКО/ИКСИ, рецидивирующим абортом или тяжелым мужским фактором. Тремя основными аргументами были: 1) ограничение метода подсчета 24 хромосом, 2) снижение возможности имплантации после биопсии, выполненной на третий день развития in vitro, и 3) отбраковка эмбрионов, которые могли быть самостоятельными. -исправлено.

Возможность амплификации всего генома из одной или двух клеток эмбриона позволяет использовать методики скрининга 24 хромосом, такие как сравнительная геномная гибридизация, проводимая на метафазных планшетах (mCGH) или на предметных стеклах с тысячами зондов, соответствующих сегменты хромосом человека, клонированные в бактериях (массив BAC) или массив однонуклеотидных полиморфизмов (aSNP), помимо классической количественной ПЦР или количественной ПЦР в реальном времени.

Другие важные разработки включают культивирование преэмбрионов до стадии бластоцисты. Это позволяет получить и изучить больше клеток при вылуплении трофэктодермы, а эффективность, достигнутая при витрификации, позволяет осуществлять перенос в другом цикле, нестимулированном, с лучшими результатами, чем свежий перенос. Эти два последних факта важны, первый с практической точки зрения, потому что исследование проводится на эмбрионе, достигшем наивысшей степени развития in vitro, а второй потому, что рецептивность эндометрия лучше в нестимулированном цикле, а также позволяет избежать потенциального ятрогенного эффекта препаратов, используемых в цикле стимуляции яичников. Что касается последнего пункта, то интересно, что данные последнего Австралийского регистра о риске врожденных дефектов после репродуктивных технологий показывают, что уровень аномалий у размороженных эмбрионов не отличается от эмбрионов, рожденных без репродуктивных технологий, в то время как уровень врожденных аномалий при переносе свежих эмбрионов больше, чем без вспомогательных репродуктивных технологий. Кроме того, перенос эмбрионов в свежем цикле дает больше времени для изучения и внедрения различных генетических методологий, которые ранее не могли быть выполнены из-за нехватки времени. Эта новая опция позволяет нам лучше организовать работу и, очевидно, повысить эффективность. Эта возможность очень важна для генетиков, которые готовы работать каждый день, когда это необходимо. Принимая во внимание вышеизложенные аргументы, мы предлагаем провести у пар, нуждающихся в ЭКО/ИКСИ, биопсию эмбриона на стадии бластоцисты, его немедленную витрификацию и пересадку наилучшей бластоцисты, оцененной по ее расширению и качеству трофэктодермы и внутренней клетки. массы, в последующем цикле с физиологически подготовленным эндометрием. Молекулярный кариотип (aCGH) будет выполнен после переноса эмбриона. Результат кариотипа перенесенных эмбрионов будет определен при проведении пациенткой теста на беременность. Таким образом, мы будем знать долю и тип хромосомных аномалий в трех группах пациенток после переноса бластоцисты: а) те, которые не смогли забеременеть, б) забеременевшие, но выкидыши и в) благополучно родившие. Мы предполагаем, что этот дизайн исследования позволит уточнить биологическое поведение преимплантационных анеуплоидий и оценить, действительно ли оно имеет клиническое значение. Если преимплантационные хромосомные аномалии имеют клиническое значение, то доля и типы анеуплоидий должны быть различными в трех упомянутых выше группах пациентов.

Мы бесплатно предложим всем беременным женщинам амниоцентез, чтобы подтвердить, соответствует ли кариотип плода трофэктодерме, особенно тем, у кого был перенос анеуплоидной бластоцисты. Тем, кто отказывается от пренатального обследования, во время родов будет проведено тестирование через пуповинную кровь. Напротив, пациенткам, у которых произошел выкидыш, в зависимости от гестационного возраста будет предложено исследование абортированного продукта, полученного с помощью выскабливания, пункции ворсин хориона, амниоцентеза или биопсии плода.

Пациентам, у которых не наступила беременность или которые потеряли ее спонтанно из-за хромосомной аномалии, может быть полезен последующий перенос с оставшимися витрифицированными эуплоидными эмбрионами или с эмбрионами, полученными в ходе нового цикла стимуляции с проведением аХГЧ перед переносом. Пациенты, достигшие цели «забери домой ребенка» и решившие завести еще детей, также могут воспользоваться преимуществами оставшейся эуплоидной девитрифицированной бластоцисты.

В этом клиническом испытании мы предпочитаем не осуществлять перенос во время стимулированного цикла, потому что пилотное исследование с переносом нестимулированного цикла дало лучшие результаты с точки зрения частоты наступления беременности по сравнению с историческими данными ПГД при свежем переносе. Другие недавние исследования переноса девитрифицированной бластоцисты в естественном цикле или с физиологически подготовленным эндометрием также показывают более высокую частоту наступления беременности и, кроме того, являются менее ятрогенными, чем перенос свежего эмбриона.

Гипотеза о скрининге эмбриональной анеуплоидии для отбора лучшего эмбриона верна и подтверждается опубликованными данными цитогенетических исследований гамет и/или эмбрионов человека. Когда пара производит достаточное количество бластоцист хорошего качества, выбор эуплоидной бластоцисты для переноса выгоден, но если пара производит только одну анеуплоидную бластоцисту, мы не уверены в ее отбрасывании, пока не сможем продемонстрировать поведение анеуплоидий в преимплантационном периоде. , особенно если обнаруженная хромосомная аномалия не является частью патологии новорожденного, иначе мы лишим пару последнего шанса стать генетическими родителями.

Мы считаем, что когда-то продемонстрированная клиническая ценность молекулярного кариотипа эмбриона и его применения могут быть полезны для достижения более высокой частоты продолжающихся беременностей в отдельных группах пациентов, таких как женщины старшего репродуктивного возраста, повторяющиеся аборты и тяжелый мужской фактор.