Skylling av livmorhulen for diagnostisering av serøs tubal intraepitelial karsinom (LUSTIC)

Begrepet "høygradig serøst karsinom" (HGSC) beskriver en gruppe kreftformer i eggstokkene, eggstokkene og bukhinnene med en aggressiv biologisk oppførsel. HGSC er den ledende dødsårsaken fra gynekologisk malignitet i vestlige siviliserte land. Kvinner som er berørt, har vanligvis sykdom i avansert stadium med metastatisk spredning gjennom bukhulen ved diagnosetidspunktet. Fem års overlevelsesrater er i området 10 til 30 prosent. Spesifisiteten til gjeldende diagnostiske verktøy (CA-125 og transvaginal ultrasonografi) er lav og ineffektiv til å oppdage HGSC tidlig nok til å forbedre kliniske resultater. Definitiv diagnose av HGSC er for det meste avhengig av kirurgisk bekreftelse. Disse funnene understreker behovet for en effektiv test for tidlig påvisning av HGSC. I den generelle befolkningen er livstidsrisikoen 1,5 prosent.

Kvinner med kimlinjemutasjoner i BRCA1- og BRCA2-genene eller en sterk familiehistorie med epitelial eggstokkreft har høy risiko for brystkreft og/eller HGSC-utvikling. Familiære eller arvelige syndromer står for omtrent 13 prosent av tilfellene av invasiv epitelial eggstok- og egglederkreft. Livstidsrisikoen for eggstokkreft er 35 til 46 prosent hos kvinner med BRCA1-genmutasjoner og 13 til 23 prosent hos de med BRCA2-mutasjoner. Igjen, selv i denne populasjonen med høy risiko for HGSC, er spesifisiteten til CA-125 og transvaginal ultrasonografi fortsatt for lav og ineffektiv til å forbedre kliniske resultater.

I løpet av de siste årene har økende vitenskapelige bevis konglomert at en stor andel av ikke bare familiær HGSC utvikler seg primært i slimhinnen i egglederen, som ligner Müllerian epitel. Disse forløperlesjonene kalles "serøse tubale intraepiteliale karsinomer" (STICs) og er preget av p53-overuttrykk på immunhistokjemi og høy Ki-67-merkingsindeks som indikerer en høy spredningsindeks. Hos over 90 prosent bærer STIC-er mutasjoner i TP53-tumorsuppressorgenet.

Når det gjelder i dag, er risikoreduserende bilateral salpingo-ooforektomi (rrBSO) den mest effektive tilnærmingen for å redusere risikoen for HGSC hos høyrisikokvinner. Blant kvinner med økt risiko for HGSC (de fleste med BRCA-mutasjoner) som gjennomgikk rrBSO, er 4 til 17 prosent funnet å ha en STIC eller til og med invasiv neoplasma, og omtrent 80 prosent av disse neoplasmene er i den ampullare delen av egglederen.

Nylige funn fremhevet det ondartede potensialet til STICs. På histopatologiske prøver kan intraluminal utskillelse av tumorceller fra STICs ofte påvises i egglederen. Denne utskillelsen av tumorceller fra STIC ser ut til å være en risikofaktor for tidlig transperitoneal metastase som ofte finnes i HGSC. Det er et sterkt klinisk behov for screening for STICs, siden de er forløperlesjonen til HGSC. Disse fakta understreker viktigheten av en effektiv - ikke-invasiv - test for tidlig påvisning av STIC.

Ovarieoverflaten, egglederne, livmorhulen og bukhulen danner til sammen et kommuniserende rom. Den fysiologiske funksjonen til den cilierte slimhinnen i rørene er å transportere egget inn i livmorhulen etter eggløsning, noe som gjør det sannsynlig at eksfolierede celler fra STICs kan bli funnet i livmorhulen.

En lovende tilnærming for påvisning av STIC er etablert av Paul Speiser og Robert Zeillinger (Molecular Oncology Group, Institutt for generell gynekologi og gynekologisk onkologi, Medical University of Wien, Østerrike). Denne tilnærmingen kalles ALPINE-teknikken (Austrian Lavage Procedure for the Detection of tubal Intraepithelial Neoplasms) (manuskript under utarbeidelse). For å lette en rask og enkel skylling av livmorhulen og proksimale rør ble det utviklet et spesialkateter (MEDICOPLAST, MF 13005, kateter for uterin- og tubalskylling). ALPINE-teknikken inkluderer en skylling av livmorhulen og proksimale eggledere og påfølgende analyse av denne skyllevæsken for tilstedeværelse av pre-maligne og ondartede celler.

For å bevise prinsippet om at tumorceller fra eggstokkreft blir kastet ut og kan finnes i skyllinger i livmorhulen, ble livmorskylling samlet inn før et kirurgisk inngrep for mistenkt eggstokkreft ved vår institusjon og ved det katolske universitetet i Leuven, avdeling gynekologisk onkologi , Belgia. Etter at malignitet ble bekreftet, ble genetiske endringer i TP53- og KRAS-genene bestemt i tumorvev. I et sett med 9 pasienter med epiteliale eggstokkreft (EOC) og 1 eggstokmetastaser av et signetringkarsinom, ble tilstedeværelsen av disse genetiske endringene undersøkt i skylleprøver ved bruk av digital dråpe-PCR (ddPCR). 10 genetiske endringer ble identifisert i tumorvev hos disse pasientene, og 9/10 (90 %) av disse endringene ble også oppdaget i den tilsvarende skylleprøven.

Videre ble det etablert en filtertilnærming, etterfulgt av p53-immunfluorescensfarging, som bekrefter tilstedeværelsen av tumorceller i skylleprøven til en ekstra pasient.

I et neste trinn ble skylleprøver av 23 ovariekarsinompasienter, og eventuelt tilsvarende tumorvev, analysert gjennom dyp sekvensering av gruppen til Bert Vogelstein (Johns Hopkins University, Baltimore, USA). Tilstedeværelsen av genetiske endringer, indikativ for eggstokkreft, kunne bekreftes i 18/23 (78,3 %) skylleprøver inkludert både tidlige og avanserte stadier.

Disse resultatene er bevis på at eggstokkreftceller blir kastet inn i egglederne og livmorhulen, og kan samles inn gjennom vår ALPINE-teknikk. Det faktum at eggstokkreftceller ble oppdaget med høy følsomhet i skylling av livmorhulen og proksimale rør viser at denne tilnærmingen har potensiale i tidlig diagnose. Derfor er etterforskerne sikre på at denne metoden også kan brukes til å oppdage premaligne forandringer hos høyrisikopasienter.

Målet med studien:

Den nåværende studien tar sikte på å svare på det vitenskapelige spørsmålet, om eksfolierede celler fra STICs blir transportert inn i livmorhulen via egglederen, og om det er mulig å oppdage disse cellene i skyllevæsken fra livmorhulen og proksimale eggledere.

Metoder:

For å løse dette spørsmålet vil etterforskerne studere 20 skylleprøver og deres 20 tilsvarende STIC-positive vevsprøver hos kvinner som velger rrBSO på grunn av økt risiko for HGSC (for det meste bærer på en BRCA-mutasjon), uten en historie med tubal okklusjon for sterilisering. Kvinner som velger å få egglederne fjernet, men eggstokkene bevart, er også kvalifisert for studien, det samme er kvinner som velger rrBSO pluss hysterektomi.