Lavaggio della cavità uterina per la diagnosi del carcinoma intraepiteliale tubarico sieroso (LUSTIC)

Il termine "carcinoma sieroso di alto grado" (HGSC) descrive un gruppo di tumori ovarici, tubarici e peritoneali con un comportamento biologico aggressivo. L'HGSC è la principale causa di morte per neoplasie ginecologiche nei paesi civilizzati occidentali. Le donne colpite, di solito hanno una malattia in stadio avanzato con diffusione metastatica in tutta la cavità addominale al momento della diagnosi. I tassi di sopravvivenza a cinque anni sono compresi tra il 10 e il 30%. La specificità degli attuali strumenti diagnostici (CA-125 ed ecografia transvaginale) è bassa e inefficace nel rilevare l'HGSC abbastanza presto da migliorare i risultati clinici. La diagnosi definitiva di HGSC si basa principalmente sulla conferma chirurgica. Questi risultati sottolineano la necessità di un test efficace per la diagnosi precoce di HGSC. Nella popolazione generale, il rischio nel corso della vita è dell'1,5%.

Le donne con mutazioni della linea germinale nel gene BRCA1 e BRCA2 o una forte storia familiare di cancro ovarico epiteliale sono ad alto rischio di cancro al seno e/o sviluppo di HGSC. Le sindromi familiari o ereditarie rappresentano circa il 13% dei casi di carcinoma ovarico epiteliale invasivo e delle tube di Falloppio. Il rischio di cancro ovarico nel corso della vita è del 35-46% nelle donne con mutazioni del gene BRCA1 e del 13-23% in quelle con mutazioni BRCA2. Ancora una volta, anche in questa popolazione ad alto rischio di HGSC, la specificità del CA-125 e dell'ecografia transvaginale è ancora troppo bassa e inefficace per migliorare i risultati clinici.

Negli ultimi anni, crescenti prove scientifiche hanno conglomerato che una grande percentuale di HGSC non solo familiare si sviluppa principalmente nel rivestimento della tuba di Falloppio, che assomiglia all'epitelio mulleriano. Queste lesioni precursori sono chiamate "carcinomi intraepiteliali tubarici sierosi" (STIC) e sono caratterizzate da sovraespressione di p53 all'immunoistochimica e da un alto indice di marcatura Ki-67 che indica un alto indice di proliferazione. In oltre il 90 percento, gli STIC portano mutazioni nel gene oncosoppressore TP53.

Per quanto riguarda oggi, la salpingo-ooforectomia bilaterale a riduzione del rischio (rrBSO) è l'approccio più efficace per ridurre il rischio di HGSC nelle donne ad alto rischio. Tra le donne con un aumentato rischio di HGSC (la maggior parte con mutazioni BRCA) sottoposte a rrBSO, dal 4 al 17% risulta avere una STIC o addirittura una neoplasia invasiva e circa l'80% di queste neoplasie si trova nella parte ampollare della tuba di Falloppio.

Recenti scoperte hanno evidenziato il potenziale maligno degli STIC. Su campioni istopatologici, la diffusione intraluminale di cellule tumorali da STIC può essere frequentemente dimostrata nella tuba di Falloppio. Questo spargimento di cellule tumorali da STIC sembra essere un fattore di rischio per le metastasi transperitoneali precoci frequentemente riscontrate nell'HGSC. Esiste una forte necessità clinica di screening per gli STIC, poiché sono la lesione precursore dell'HGSC. Questi fatti sottolineano l'importanza di un test efficace - non invasivo - per la diagnosi precoce delle STIC.

La superficie ovarica, le tube di Falloppio, la cavità uterina e la cavità peritoneale formano insieme un compartimento comunicante. La funzione fisiologica del rivestimento ciliato delle tube è di trasportare l'uovo nella cavità uterina dopo l'ovulazione, rendendo così probabile che le cellule esfoliate dagli STIC possano essere trovate nella cavità uterina.

Un approccio promettente per il rilevamento delle STIC è stato stabilito da Paul Speiser e Robert Zeillinger (Gruppo di Oncologia Molecolare, Dipartimento di Ginecologia Generale e Oncologia Ginecologica, Università di Medicina di Vienna, Austria). Questo approccio è chiamato tecnica ALPINE (Austrian Lavage Procedure for the Detection of tubal Intraepithelial Neoplasms) (manoscritto in preparazione). Per facilitare un lavaggio rapido e semplice della cavità uterina e dei tubi prossimali, è stato sviluppato un catetere speciale (MEDICOPLAST, MF 13005, catetere per lavaggio uterino e tubarico). La tecnica ALPINE comprende un lavaggio della cavità uterina e delle tube prossimali di Falloppio e la successiva analisi di questo fluido di lavaggio per la presenza di cellule premaligne e maligne.

Per dimostrare in linea di principio che le cellule tumorali del carcinoma ovarico si disperdono e possono essere trovate nei lavaggi della cavità uterina, sono stati raccolti lavaggi uterini prima di un intervento chirurgico per sospetta neoplasia ovarica presso il nostro istituto e presso l'Università Cattolica di Lovanio, Divisione di Oncologia Ginecologica , Belgio. Dopo che la malignità è stata confermata, i cambiamenti genetici nei geni TP53 e KRAS sono stati determinati nel tessuto tumorale. In un set di 9 pazienti con carcinoma ovarico epiteliale (EOC) e 1 metastasi ovarica di un carcinoma ad anello con castone, la presenza di questi cambiamenti genetici è stata esaminata in campioni di lavaggio, utilizzando la PCR con goccioline digitali (ddPCR). 10 cambiamenti genetici sono stati identificati nel tessuto tumorale di questi pazienti e 9/10 (90%) di questi cambiamenti sono stati rilevati anche nel corrispondente campione di lavaggio.

Inoltre, è stato stabilito un approccio di filtro, seguito dalla colorazione con immunofluorescenza p53, confermando la presenza di cellule tumorali nel campione di lavaggio di un altro paziente.

In una fase successiva, campioni di lavaggio di 23 pazienti con carcinoma ovarico e, se applicabile, tessuto tumorale corrispondente, sono stati analizzati mediante sequenziamento profondo dal gruppo di Bert Vogelstein (Johns Hopkins University, Baltimora, USA). La presenza di mutazioni genetiche, indicative di carcinoma ovarico, potrebbe essere confermata in 18/23 (78,3%) campione di lavaggio comprendente sia lo stadio iniziale che quello avanzato.

Questi risultati sono la prova che le cellule tumorali ovariche vengono versate nelle tube di Falloppio e nella cavità uterina e possono essere raccolte attraverso la nostra tecnica ALPINE. Il fatto che le cellule tumorali ovariche siano state rilevate con elevata sensibilità nel lavaggio della cavità uterina e dei tubi prossimali dimostra che questo approccio ha un potenziale nella diagnosi precoce. Pertanto, i ricercatori sono fiduciosi che questo metodo possa essere applicato anche nel rilevamento di alterazioni precancerose in pazienti ad alto rischio.

Scopo dello studio:

L'attuale studio mira a rispondere alla domanda scientifica, se le cellule esfoliate dagli STIC vengano trasportate nella cavità uterina attraverso la tuba di Falloppio e se sia possibile rilevare tali cellule nel fluido di lavaggio dalla cavità uterina e dalle tube di Falloppio prossimali.

Metodi:

Per rispondere a questa domanda, i ricercatori studieranno 20 campioni di lavaggio e i loro 20 campioni di tessuto STIC-positivi corrispondenti in donne che optano per rrBSO a causa dell'aumentato rischio di HGSC (principalmente portatori di una mutazione BRCA), senza una storia di occlusione tubarica per la sterilizzazione. Le donne che scelgono di rimuovere le tube di Falloppio ma le ovaie conservate sono ammissibili allo studio, così come le donne che optano per rrBSO più isterectomia.