Płukanie jamy macicy w diagnostyce raka surowiczego jajowodów śródnabłonkowych (LUSTIC)

Termin „rak surowiczy wysokiego stopnia” (HGSC) opisuje grupę raków jajnika, jajowodów i otrzewnej o agresywnym zachowaniu biologicznym. HGSC jest główną przyczyną zgonów z powodu nowotworów ginekologicznych w cywilizowanych krajach zachodnich. Kobiety dotknięte chorobą zwykle mają zaawansowaną postać choroby z przerzutami do jamy brzusznej w momencie rozpoznania. Wskaźniki przeżycia pięcioletniego mieszczą się w przedziale od 10 do 30 procent. Swoistość obecnych narzędzi diagnostycznych (CA-125 i ultrasonografia przezpochwowa) jest niska i nieskuteczna w wykrywaniu HGSC wystarczająco wcześnie, aby poprawić wyniki kliniczne. Ostateczne rozpoznanie HGSC opiera się głównie na potwierdzeniu chirurgicznym. Odkrycia te podkreślają potrzebę opracowania skutecznego testu do wczesnego wykrywania HGSC. W populacji ogólnej ryzyko w ciągu całego życia wynosi 1,5%.

Kobiety z mutacjami linii zarodkowej genów BRCA1 i BRCA2 lub obciążonym wywiadem rodzinnym w kierunku nabłonkowego raka jajnika są obarczone wysokim ryzykiem raka piersi i/lub rozwoju HGSC. Zespoły rodzinne lub dziedziczne stanowią około 13 procent przypadków inwazyjnego nabłonkowego raka jajnika i jajowodu. Ryzyko zachorowania na raka jajnika w ciągu całego życia wynosi od 35 do 46 procent u kobiet z mutacjami genu BRCA1 i od 13 do 23 procent u kobiet z mutacjami BRCA2. Ponownie, nawet w tej populacji z wysokim ryzykiem HGSC, specyficzność CA-125 i ultrasonografii przezpochwowej jest wciąż zbyt niska i nieskuteczna, aby poprawić wyniki kliniczne.

W ostatnich latach zebrano coraz więcej dowodów naukowych, że duża część nie tylko rodzinnego HGSC rozwija się głównie w wyściółce jajowodu, która przypomina nabłonek Müllera. Te zmiany prekursorowe nazywane są „śródnabłonkowymi rakami jajowodów surowiczych” (STIC) i charakteryzują się nadekspresją p53 w immunohistochemii i wysokim wskaźnikiem znakowania Ki-67, co wskazuje na wysoki wskaźnik proliferacji. W ponad 90 procentach STIC są nosicielami mutacji w genie supresorowym guza TP53.

Na dzień dzisiejszy obustronna resekcja jajników (rrBSO) zmniejszająca ryzyko jest najskuteczniejszym podejściem do zmniejszania ryzyka HGSC u kobiet z grupy wysokiego ryzyka. Wśród kobiet ze zwiększonym ryzykiem HGSC (większość z mutacjami BRCA), które przeszły rrBSO, stwierdza się, że od 4 do 17 procent ma STIC lub nawet inwazyjny nowotwór, a około 80 procent tych nowotworów znajduje się w bańkowej części jajowodu.

Ostatnie odkrycia podkreśliły złośliwy potencjał STIC. Na próbkach histopatologicznych często można wykazać wydzielanie komórek nowotworowych z STIC do światła jajowodu. To zrzucanie komórek nowotworowych z STIC wydaje się być czynnikiem ryzyka wczesnych przerzutów przezotrzewnowych często spotykanych w HGSC. Istnieje silna kliniczna potrzeba badań przesiewowych w kierunku STIC, ponieważ są one prekursorowymi zmianami HGSC. Fakty te podkreślają znaczenie skutecznego – nieinwazyjnego – testu do wczesnego wykrywania STIC.

Powierzchnia jajnika, jajowody, jama macicy i jama otrzewnej tworzą razem przedział łączący. Fizjologiczną funkcją rzęskowej wyściółki jajowodów jest transport komórki jajowej do jamy macicy po owulacji, co stwarza prawdopodobieństwo, że złuszczone komórki z STIC można znaleźć w jamie macicy.

Obiecujące podejście do wykrywania STIC zostało opracowane przez Paula Speisera i Roberta Zeillingera (Molecular Oncology Group, Department of General Gynecology and Gynaecologic Oncology, Medical University of Vienna, Austria). To podejście nazywa się techniką ALPINE (austriacka procedura płukania do wykrywania śródnabłonkowych nowotworów jajowodów) (rękopis w przygotowaniu). Aby ułatwić szybkie i łatwe płukanie jamy macicy i jajowodów, opracowano specjalny cewnik (MEDICOPLAST, MF 13005, cewnik do płukania macicy i jajowodów). Technika ALPINE obejmuje płukanie jamy macicy i proksymalnych jajowodów, a następnie analizę tego płynu popłuczynowego na obecność komórek przednowotworowych i złośliwych.

W celu potwierdzenia zasady, że komórki nowotworowe z raka jajnika są wydalane i można je znaleźć w popłuczynach jamy macicy, popłuczyny macicy pobrano przed interwencją chirurgiczną z powodu podejrzenia nowotworu złośliwego jajnika w naszej instytucji oraz na Katolickim Uniwersytecie w Leuven, Oddział Ginekologii Onkologicznej , Belgia. Po potwierdzeniu złośliwości określono zmiany genetyczne w genach TP53 i KRAS w tkance nowotworowej. W zestawie 9 pacjentek z nabłonkowym rakiem jajnika (EOC) i 1 jajnika z przerzutami raka sygnetu, obecność tych zmian genetycznych zbadano w próbkach popłuczyn, stosując cyfrowy PCR kropelkowy (ddPCR). W tkance nowotworowej tych pacjentów zidentyfikowano 10 zmian genetycznych, a 9/10 (90%) z tych zmian wykryto również w odpowiedniej próbce popłuczyn.

Ponadto ustalono podejście filtracyjne, a następnie barwienie immunofluorescencyjne p53, potwierdzając obecność komórek nowotworowych w próbce popłuczyn jednego dodatkowego pacjenta.

W następnym etapie próbki popłuczyn 23 pacjentek z rakiem jajnika i, jeśli ma to zastosowanie, odpowiednią tkankę nowotworową zostały przeanalizowane poprzez głębokie sekwencjonowanie przez grupę Berta Vogelsteina (Johns Hopkins University, Baltimore, USA). Obecność zmian genetycznych wskazujących na raka jajnika można było potwierdzić w 18/23 (78,3%) próbkach pobranych z popłuczyn, obejmujących zarówno stadia wczesne, jak i zaawansowane.

Wyniki te są dowodem na to, że komórki raka jajnika są wydalane do jajowodów i jamy macicy i można je pobrać za pomocą naszej techniki ALPINE. Fakt, że komórki raka jajnika wykrywano z dużą czułością w popłuczynach z jamy macicy i jajowodów proksymalnych, pokazuje, że podejście to ma potencjał we wczesnej diagnostyce. W związku z tym badacze są przekonani, że metoda ta może znaleźć zastosowanie również w wykrywaniu zmian przednowotworowych u pacjentów z grupy wysokiego ryzyka.

Cel badania:

Obecne badanie ma na celu odpowiedź na naukowe pytanie, czy złuszczone komórki z STIC przedostają się do jamy macicy przez jajowód i czy możliwe jest wykrycie tych komórek w płynie popłuczynowym z jamy macicy i bliższych jajowodów.

Metody:

Aby odpowiedzieć na to pytanie, badacze zbadają 20 próbek popłuczyn i odpowiadających im 20 próbek tkanek STIC-dodatnich u kobiet, które zdecydowały się na rrBSO z powodu zwiększonego ryzyka HGSC (głównie nosicieli mutacji BRCA), bez historii niedrożności jajowodów do sterylizacji. Kobiety, które zdecydują się na usunięcie jajowodów, ale z zachowaniem jajników, również kwalifikują się do badania, podobnie jak kobiety, które zdecydują się na rrBSO z histerektomią.