Nye endoskopiske avbildningsmetoder for evaluering av blodkar i gastrointestinale kreftformer (IM-ANG)

Hovedmålene for prosjektet er:

• Sanntidsavbildning av angiogenese i GI-svulster ved bruk av minimalt invasive metoder:

  • Endoskopisk forstørrelse med smalbåndsavbildning (M-NBI) for makroskopisk vurdering av det vaskulære mønsteret
  • In vivo probebasert konfokal laserendomikroskopi (pCLE) for karakterisering av det mikrovaskulære mønsteret
• Offline analyse av M-NBI og pCLE sekvenser med ekstra bildebehandlingsprogramvare
• Immunhistokjemisk evaluering av angiogenese i GI-kreft basert på MVD-beregning
• Sammenligning av bildediagnostikk (M-NBI og pCLE) og patologiske (immunhistokjemi) data ved bruk av datastøttet diagnose (CAD) Studien vil inkludere pasienter med gastrisk (n=20) og kolorektal (n=30) kreft som vil bli prospektivt evaluert i henhold til forhåndsdefinerte protokoller.

Forstørrelsesendoskopi med smalbåndsavbildning (M-NBI) vil bli utført for hver pasient etter identifisering av lesjonen med konvensjonell hvitlysendoskopi. Med bare et trykk på en knapp brukes optiske filtre for å redusere det lysende lyset til 415 nm (blått) og 540 nm (grønt) bølgelengder for forbedret visualisering av kapillærforandringer. Klassifisering av det vaskulære mønsteret vil bli gjort på stedet av undersøkeren (DIR), og flere bilder vil bli lagret for senere analyse utenfor stedet. Mens tolkning av endoskopiske bilder kan være subjektiv og operatøravhengig, vil vi også utføre en objektiv evaluering med datastøttet analyse basert på bildebehandlingsprogramvare. En vaskulær region av interesse vil bli valgt i NBI-modus for målrettet mikroskopisk undersøkelse med pCLE og vevsprøvetaking for patologi og IHC-vurdering. M-NBI undersøkelse vil også bli utført for normal slimhinne for komparativ analyse av det vaskulære mønsteret.

Konfokal laserendomikroskopi (CLE) vil bli utført for visualisering og karakterisering av vaskulære forandringer inne i svulsten, ved bruk av det probebaserte CLE-systemet (pCLE). Den raskere bildeopptakshastigheten til pCLE-systemet (12 bilder per sekund) muliggjør direkte in vivo-visualisering av blodstrømmen. Hovedfordelen med pCLE-systemet er at det enkelt kan integreres i bildebehandlingsprotokollen, da dets fleksible kateterprober kan føres gjennom arbeidskanalene til endoskopene når det vaskulære området av interesse er valgt med M-NBI. For pCLE-undersøkelser vil vi bruke fluorescein som kontrastmiddel som allerede er godkjent for in vivo humane undersøkelser. Fluorescein administreres intravenøst, og fremhever karene og omkringliggende epitelstrukturer. Det vaskulære mønsteret vil bli vurdert i sanntid så vel som off-site basert på objektive målinger av de lagrede sekvensene som vil inkludere ulike vaskulære parametere (kardiameter, vaskulær tetthet). Disse vil bli bestemt for både tumorvev og normal tilstøtende slimhinne som kontroll, ved hjelp av dedikert programvare.

Immunhistokjemi (IHC)-analyse med MVD-beregninger vil bli vurdert og korrelert til avbildningsfunnene. Parede biopsier av svulster og normal GI-slimhinne oppnådd under endoskopiske prosedyrer (som sikrer samregistrering med M-NBI og pCLE undersøkte regioner) vil bli behandlet for fiksering i 10 % nøytral bufret formalin (NBF), parafininnstøping og seksjonering. For MVD-analyse vil blokkene bli fullstendig kuttet i serielle seksjoner 4-25 μm tykke, med en tykk seksjon for hver 10. tynne seksjon. For å vurdere den totale vaskulære arkitekturen vil vi bruke ikke-selektive endotelcellemarkører, som anti-CD31 og anti-CD34 antistoffer.