Nuovi metodi di imaging endoscopico per la valutazione dei vasi sanguigni nei tumori gastrointestinali (IM-ANG)

Gli obiettivi chiave del progetto sono:

• Imaging in tempo reale dell'angiogenesi nei tumori gastrointestinali utilizzando metodi minimamente invasivi:

  • Ingrandimento endoscopico con imaging a banda stretta (M-NBI) per la valutazione macroscopica del pattern vascolare
  • Endomicroscopia laser confocale basata su sonda in vivo (pCLE) per la caratterizzazione del pattern microvascolare
• Analisi offline delle sequenze M-NBI e pCLE con software aggiuntivo di elaborazione delle immagini
• Valutazione immunoistochimica dell'angiogenesi nei tumori GI basata sul calcolo MVD
• Confronto dei dati di imaging (M-NBI e pCLE) e patologici (immunoistochimica) utilizzando la diagnosi assistita da computer (CAD) Lo studio includerà pazienti con tumori gastrici (n=20) e colorettali (n=30) che saranno valutati in modo prospettico secondo il protocolli predefiniti.

L'endoscopia di ingrandimento con imaging a banda stretta (M-NBI) verrà eseguita per ciascun paziente dopo l'identificazione della lesione con l'endoscopia convenzionale a luce bianca. Con la semplice pressione di un pulsante vengono applicati filtri ottici per ridurre la luce illuminante a lunghezze d'onda di 415 nm (blu) e 540 nm (verde) per una migliore visualizzazione dei cambiamenti capillari. La classificazione del pattern vascolare verrà effettuata in loco dall'esaminatore (DIR) e più immagini verranno salvate per un'analisi successiva fuori sede. Sebbene l'interpretazione delle immagini endoscopiche possa essere soggettiva e dipendente dall'operatore, eseguiremo anche una valutazione obiettiva con analisi assistita da computer basata su software di elaborazione delle immagini. Una regione vascolare di interesse sarà selezionata in modalità NBI per l'esame microscopico mirato con pCLE e il campionamento dei tessuti per la valutazione della patologia e dell'IHC. L'esame M-NBI verrà eseguito anche per la mucosa normale per l'analisi comparativa del pattern vascolare.

L'endomicroscopia laser confocale (CLE) verrà eseguita per la visualizzazione e la caratterizzazione dei cambiamenti vascolari all'interno del tumore, utilizzando il sistema CLE basato su sonda (pCLE). La maggiore velocità di acquisizione delle immagini del sistema pCLE (12 fotogrammi al secondo) consente la visualizzazione diretta in vivo del flusso sanguigno. Il vantaggio principale del sistema pCLE è che può essere facilmente integrato nel protocollo di imaging poiché le sue sonde flessibili del catetere possono essere fatte passare attraverso i canali di lavoro degli endoscopi una volta selezionata l'area vascolare di interesse con M-NBI. Per gli esami pCLE utilizzeremo la fluoresceina come agente di contrasto che è già approvato per gli esami umani in vivo. La fluoresceina viene somministrata per via endovenosa, evidenziando i vasi e le strutture epiteliali circostanti. Il pattern vascolare sarà valutato in tempo reale e fuori sede sulla base di misurazioni oggettive delle sequenze memorizzate che includeranno diversi parametri vascolari (diametro del vaso, densità vascolare). Questi saranno determinati sia per il tessuto tumorale che per la normale mucosa adiacente come controllo, utilizzando un software dedicato.

L'analisi immunoistochimica (IHC) con i calcoli MVD sarà valutata e correlata ai risultati dell'imaging. Biopsie accoppiate di tumori e mucosa gastrointestinale normale ottenute durante le procedure endoscopiche (assicurando la co-registrazione con le regioni esaminate M-NBI e pCLE) saranno processate per la fissazione in formalina tamponata neutra al 10% (NBF), inclusione in paraffina e sezionamento. Per l'analisi MVD, i blocchi saranno completamente tagliati in sezioni seriali di 4-25 μm di spessore, con una sezione spessa ogni 10 sezioni sottili. Per valutare l'architettura vascolare totale utilizzeremo marcatori cellulari endoteliali non selettivi, come gli anticorpi anti-CD31 e anti-CD34.