Novos métodos de imagem endoscópica para a avaliação de vasos sanguíneos em cânceres gastrointestinais (IM-ANG)

Os principais objetivos do projeto são:

• Imagens em tempo real da angiogênese em tumores gastrointestinais usando métodos minimamente invasivos:

  • Ampliação endoscópica com imagem de banda estreita (M-NBI) para avaliação macroscópica do padrão vascular
  • Endomicroscopia a laser confocal baseada em sonda in vivo (pCLE) para caracterização do padrão microvascular
• Análise offline de sequências M-NBI e pCLE com software de processamento de imagem adicional
• Avaliação imuno-histoquímica da angiogênese em cânceres gastrointestinais com base no cálculo de MVD
• Comparação de dados de imagem (M-NBI e pCLE) e patológicos (imuno-histoquímica) usando diagnóstico auxiliado por computador (CAD) O estudo incluirá pacientes com câncer gástrico (n=20) e colorretal (n=30) que serão avaliados prospectivamente de acordo com o protocolos predefinidos.

Endoscopia de magnificação com imagem de banda estreita (M-NBI) será realizada para cada paciente após a identificação da lesão com endoscopia de luz branca convencional. Com apenas um toque de um botão, os filtros ópticos são aplicados para reduzir a luz de iluminação para comprimentos de onda de 415 nm (azul) e 540 nm (verde) para visualização aprimorada das alterações capilares. A classificação do padrão vascular será feita no local pelo examinador (DIR) e várias imagens serão salvas para análise posterior fora do local. Embora a interpretação das imagens endoscópicas possa ser subjetiva e dependente do operador, também realizaremos uma avaliação objetiva com análise auxiliada por computador com base em software de processamento de imagem. Uma região vascular de interesse será selecionada no modo NBI para exame microscópico direcionado com pCLE e amostragem de tecido para avaliação de patologia e IHC. O exame M-NBI também será realizado para mucosa normal para análise comparativa do padrão vascular.

A endomicroscopia confocal a laser (CLE) será realizada para visualização e caracterização das alterações vasculares no interior do tumor, usando o sistema CLE baseado em sonda (pCLE). A taxa de aquisição de imagem mais rápida do sistema pCLE (12 quadros por segundo) permite a visualização direta in vivo do fluxo sanguíneo. A principal vantagem do sistema pCLE é que ele pode ser facilmente integrado ao protocolo de imagem, pois suas sondas de cateter flexíveis podem ser passadas pelos canais de trabalho dos endoscópios, uma vez que a área vascular de interesse é selecionada com M-NBI. Para exames de pCLE, usaremos a fluoresceína como agente de contraste que já está aprovado para exames humanos in vivo. A fluoresceína é administrada por via intravenosa, realçando os vasos e as estruturas epiteliais circundantes. O padrão vascular será avaliado em tempo real, bem como fora do local, com base em medições objetivas das sequências armazenadas que incluirão diferentes parâmetros vasculares (diâmetro do vaso, densidade vascular). Estes serão determinados tanto para o tecido tumoral quanto para a mucosa normal adjacente como controle, usando um software dedicado.

A análise de imuno-histoquímica (IHC) com cálculos de MVD será avaliada e correlacionada com os achados de imagem. Biópsias pareadas de tumores e mucosa GI normal obtidas durante procedimentos endoscópicos (garantindo co-registro com regiões examinadas por M-NBI e pCLE) serão processadas para fixação em formalina tamponada neutra a 10% (NBF), inclusão em parafina e corte. Para análise MVD, os blocos serão cortados completamente em seções seriadas de 4 a 25 μm de espessura, com uma seção de espessura para cada 10 seções delgadas. Para avaliar a arquitetura vascular total utilizaremos marcadores não seletivos de células endoteliais, como anticorpos anti-CD31 e anti-CD34.