Nuevos métodos de imágenes endoscópicas para la evaluación de los vasos sanguíneos en los cánceres gastrointestinales (IM-ANG)

Los objetivos clave del proyecto son:

• Obtención de imágenes en tiempo real de la angiogénesis en tumores GI mediante el uso de métodos mínimamente invasivos:

  • Ampliación endoscópica con imágenes de banda estrecha (M-NBI) para la evaluación macroscópica del patrón vascular
  • Endomicroscopia láser confocal basada en sonda in vivo (pCLE) para la caracterización del patrón microvascular
• Análisis fuera de línea de secuencias M-NBI y pCLE con software de procesamiento de imágenes adicional
• Evaluación inmunohistoquímica de la angiogénesis en cánceres gastrointestinales basada en el cálculo de MVD
• Comparación de datos de imágenes (M-NBI y pCLE) y patológicos (inmunohistoquímica) mediante diagnóstico asistido por computadora (CAD) El estudio incluirá pacientes con cáncer gástrico (n=20) y colorrectal (n=30) que se evaluarán prospectivamente de acuerdo con el protocolos predefinidos.

Se realizará una endoscopia de aumento con imágenes de banda estrecha (M-NBI) para cada paciente después de la identificación de la lesión con endoscopia de luz blanca convencional. Con solo presionar un botón, se aplican filtros ópticos para reducir la luz de iluminación a longitudes de onda de 415 nm (azul) y 540 nm (verde) para mejorar la visualización de los cambios capilares. El examinador (DIR) realizará la clasificación del patrón vascular en el sitio y se guardarán varias imágenes para su posterior análisis fuera del sitio. Si bien la interpretación de las imágenes endoscópicas puede ser subjetiva y depende del operador, también realizaremos una evaluación objetiva con un análisis asistido por computadora basado en un software de procesamiento de imágenes. Se seleccionará una región vascular de interés en modo NBI para un examen microscópico específico con pCLE y muestreo de tejido para evaluación de patología e IHQ. El examen M-NBI también se realizará para la mucosa normal para el análisis comparativo del patrón vascular.

Se realizará una endomicroscopía láser confocal (CLE) para la visualización y caracterización de los cambios vasculares dentro del tumor, utilizando el sistema CLE basado en sonda (pCLE). La velocidad de adquisición de imágenes más rápida del sistema pCLE (12 fotogramas por segundo) permite la visualización directa in vivo del flujo sanguíneo. La principal ventaja del sistema pCLE es que se puede integrar fácilmente en el protocolo de imagen ya que sus sondas de catéter flexibles se pueden pasar a través de los canales de trabajo de los endoscopios una vez que se selecciona el área vascular de interés con M-NBI. Para los exámenes pCLE, utilizaremos fluoresceína como agente de contraste que ya está aprobado para exámenes humanos in vivo. La fluoresceína se administra por vía intravenosa, resaltando los vasos y las estructuras epiteliales circundantes. El patrón vascular se evaluará en tiempo real y fuera del sitio en función de mediciones objetivas de las secuencias almacenadas que incluirán diferentes parámetros vasculares (diámetro del vaso, densidad vascular). Estos se determinarán tanto para el tejido tumoral como para la mucosa adyacente normal como control, utilizando un software específico.

Se evaluará el análisis de inmunohistoquímica (IHC) con cálculos de MVD y se correlacionará con los hallazgos de las imágenes. Las biopsias pareadas de tumores y mucosa gastrointestinal normal obtenidas durante procedimientos endoscópicos (que garantizan el registro conjunto con las regiones examinadas por M-NBI y pCLE) se procesarán para su fijación en formalina tamponada neutra (NBF) al 10 %, inclusión en parafina y corte. Para el análisis MVD, los bloques se cortarán completamente en secciones seriadas de 4-25 μm de espesor, con una sección gruesa por cada 10 secciones delgadas. Para evaluar la arquitectura vascular total, utilizaremos marcadores de células endoteliales no selectivos, como los anticuerpos anti-CD31 y anti-CD34.