Nowe metody obrazowania endoskopowego do oceny naczyń krwionośnych w raku przewodu pokarmowego (IM-ANG)

Kluczowymi celami projektu są:

• Obrazowanie w czasie rzeczywistym angiogenezy w guzach przewodu pokarmowego metodami małoinwazyjnymi:

  • Powiększenie endoskopowe z obrazowaniem wąskopasmowym (M-NBI) do makroskopowej oceny układu naczyniowego
  • Laserowa endomikroskopia konfokalna (pCLE) oparta na sondzie in vivo do charakteryzowania wzoru mikrokrążenia
• Analiza offline sekwencji M-NBI i pCLE z dodatkowym oprogramowaniem do przetwarzania obrazu
• Immunohistochemiczna ocena angiogenezy w nowotworach przewodu pokarmowego na podstawie obliczeń MVD
• Porównanie danych obrazowych (M-NBI i pCLE) i patologicznych (immunohistochemicznych) za pomocą diagnostyki wspomaganej komputerowo (CAD) Badanie obejmie pacjentów z rakiem żołądka (n=20) i jelita grubego (n=30), którzy zostaną poddani prospektywnej ocenie zgodnie z predefiniowane protokoły.

Endoskopia w powiększeniu z obrazowaniem wąskopasmowym (M-NBI) zostanie przeprowadzona u każdego pacjenta po zidentyfikowaniu zmiany za pomocą konwencjonalnej endoskopii w świetle białym. Za jednym naciśnięciem przycisku stosowane są filtry optyczne w celu zmniejszenia oświetlającego światła do długości fali 415 nm (niebieski) i 540 nm (zielony) w celu lepszej wizualizacji zmian kapilarnych. Klasyfikacja układu naczyniowego zostanie przeprowadzona na miejscu przez egzaminatora (DIR), a wiele obrazów zostanie zapisanych do późniejszej analizy poza ośrodkiem. Podczas gdy interpretacja obrazów endoskopowych może być subiektywna i zależna od operatora, przeprowadzimy również obiektywną ocenę za pomocą analizy wspomaganej komputerowo w oparciu o oprogramowanie do przetwarzania obrazu. Obszar naczyniowy będący przedmiotem zainteresowania zostanie wybrany w trybie NBI do ukierunkowanego badania mikroskopowego z pCLE i pobierania próbek tkanek do oceny patologii i IHC. Badanie M-NBI zostanie również wykonane dla prawidłowej błony śluzowej w celu analizy porównawczej układu naczyniowego.

Konfokalna laserowa endomikroskopia (CLE) zostanie wykonana w celu uwidocznienia i scharakteryzowania zmian naczyniowych wewnątrz guza z wykorzystaniem systemu CLE opartego na sondach (pCLE). Szybsza akwizycja obrazu systemu pCLE (12 klatek na sekundę) umożliwia bezpośrednią wizualizację przepływu krwi in vivo. Główną zaletą systemu pCLE jest to, że można go łatwo zintegrować z protokołem obrazowania, ponieważ jego elastyczne sondy cewnikowe można przepuszczać przez kanały robocze endoskopów po wybraniu obszaru zainteresowania naczyniowego za pomocą M-NBI. Do badań pCLE użyjemy fluoresceiny jako środka kontrastowego, który jest już dopuszczony do badań in vivo na ludziach. Fluoresceinę podaje się dożylnie, uwydatniając naczynia i otaczające je struktury nabłonkowe. Wzór naczyniowy zostanie oceniony w czasie rzeczywistym, jak również poza miejscem na podstawie obiektywnych pomiarów przechowywanych sekwencji, które będą obejmować różne parametry naczyniowe (średnica naczynia, gęstość naczyń). Zostaną one określone zarówno dla tkanki nowotworowej, jak i normalnej przylegającej błony śluzowej jako kontroli, przy użyciu dedykowanego oprogramowania.

Analiza immunohistochemiczna (IHC) z obliczeniami MVD zostanie oceniona i skorelowana z wynikami badań obrazowych. Sparowane biopsje guzów i prawidłowej błony śluzowej przewodu pokarmowego uzyskane podczas zabiegów endoskopowych (zapewniających korejestrację z badanymi regionami M-NBI i pCLE) zostaną poddane obróbce w celu utrwalenia w 10% obojętnej buforowanej formalinie (NBF), zatopieniu w parafinie i pocięciu. Do analizy MVD bloki zostaną całkowicie pocięte na seryjne skrawki o grubości 4-25 μm, z jednym grubym skrawkiem na każde 10 cienkich skrawków. W celu oceny całkowitej architektury naczyniowej wykorzystamy nieselektywne markery komórek śródbłonka, takie jak przeciwciała anty-CD31 i anty-CD34.