Новые методы эндоскопической визуализации для оценки состояния кровеносных сосудов при раке желудочно-кишечного тракта (IM-ANG)

Ключевыми задачами проекта являются:

• Визуализация ангиогенеза в опухолях ЖКТ в режиме реального времени с использованием минимально инвазивных методов:

  • Эндоскопическое увеличение с узкоспектральной визуализацией (M-NBI) для макроскопической оценки сосудистого рисунка
  • Конфокальная лазерная эндомикроскопия (pCLE) на основе зондов in vivo для характеристики микрососудистого рисунка
• Автономный анализ последовательностей M-NBI и pCLE с дополнительным программным обеспечением для обработки изображений
• Иммуногистохимическая оценка ангиогенеза при раке ЖКТ на основе расчета MVD
• Сравнение данных визуализации (M-NBI и pCLE) и патологических данных (иммуногистохимия) с использованием компьютерной диагностики (CAD) предопределенные протоколы.

Эндоскопия с увеличением с узкоспектральной визуализацией (M-NBI) будет выполняться для каждого пациента после идентификации поражения с помощью обычной эндоскопии в белом свете. Всего одним нажатием кнопки применяются оптические фильтры для уменьшения светового излучения до длин волн 415 нм (синий) и 540 нм (зеленый) для улучшения визуализации капиллярных изменений. Классификация сосудистого рисунка будет сделана на месте исследователем (DIR), и несколько изображений будут сохранены для последующего анализа за пределами места. Хотя интерпретация эндоскопических изображений может быть субъективной и зависеть от оператора, мы также проведем объективную оценку с помощью компьютерного анализа на основе программного обеспечения для обработки изображений. Интересующая область сосуда будет выбрана в режиме NBI для целенаправленного микроскопического исследования с помощью pCLE и взятия проб тканей для выявления патологии и оценки IHC. Исследование M-NBI также будет выполнено для нормальной слизистой оболочки для сравнительного анализа сосудистого рисунка.

Конфокальная лазерная эндомикроскопия (CLE) будет проводиться для визуализации и характеристики сосудистых изменений внутри опухоли с использованием системы CLE на основе зонда (pCLE). Более высокая скорость получения изображений системой pCLE (12 кадров в секунду) позволяет напрямую визуализировать поток крови in vivo. Основное преимущество системы pCLE заключается в том, что ее можно легко интегрировать в протокол визуализации, поскольку ее гибкие катетерные зонды можно пропускать через рабочие каналы эндоскопов после выбора интересующей вас сосудистой зоны с помощью M-NBI. Для исследований pCLE мы будем использовать флуоресцеин в качестве контрастного вещества, которое уже одобрено для исследований человека in vivo. Флуоресцеин вводят внутривенно, выделяя сосуды и окружающие эпителиальные структуры. Сосудистый рисунок будет оцениваться в режиме реального времени, а также удаленно на основе объективных измерений сохраненных последовательностей, которые будут включать различные параметры сосудов (диаметр сосудов, плотность сосудов). Они будут определены как для опухолевой ткани, так и для нормальной прилегающей слизистой оболочки в качестве контроля с использованием специального программного обеспечения.

Анализ иммуногистохимии (IHC) с расчетами MVD будет оцениваться и коррелироваться с результатами визуализации. Парные биоптаты опухолей и нормальной слизистой оболочки ЖКТ, полученные во время эндоскопических процедур (обеспечивающих совместную регистрацию с областями исследования M-NBI и pCLE), будут обработаны для фиксации в 10% нейтральном забуференном формалине (NBF), заливки парафином и разрезания. Для анализа MVD блоки будут полностью нарезаны на серийные срезы толщиной 4-25 мкм, с одним толстым срезом на каждые 10 тонких срезов. Для оценки общей сосудистой архитектуры мы будем использовать неселективные маркеры эндотелиальных клеток, такие как анти-CD31 и анти-CD34 антитела.