Nya endoskopiska avbildningsmetoder för utvärdering av blodkärl i gastrointestinala cancer (IM-ANG)

De viktigaste målen för projektet är:

• Realtidsavbildning av angiogenes i GI-tumörer genom att använda minimalt invasiva metoder:

  • Endoskopisk förstoring med smalbandsavbildning (M-NBI) för makroskopisk bedömning av det vaskulära mönstret
  • In vivo sondbaserad konfokal laserendomikroskopi (pCLE) för karakterisering av det mikrovaskulära mönstret
• Offlineanalys av M-NBI- och pCLE-sekvenser med ytterligare bildbehandlingsprogram
• Immunhistokemisk utvärdering av angiogenes i GI-cancer baserad på MVD-beräkning
• Jämförelse av bildbehandling (M-NBI och pCLE) och patologiska (immunhistokemi) data med hjälp av datorstödd diagnos (CAD) Studien kommer att inkludera patienter med gastrisk (n=20) och kolorektal (n=30) cancer som kommer att utvärderas prospektivt enligt fördefinierade protokoll.

Förstoringsendoskopi med smalbandsavbildning (M-NBI) kommer att utföras för varje patient efter identifiering av lesionen med konventionell vitljusendoskopi. Med bara en knapptryckning appliceras optiska filter för att reducera det upplysande ljuset till 415 nm (blått) och 540 nm (grönt) våglängder för förbättrad visualisering av kapillärförändringar. Klassificering av det vaskulära mönstret kommer att göras på plats av granskaren (DIR) och flera bilder kommer att sparas för senare analys utanför platsen. Även om tolkning av endoskopiska bilder kan vara subjektiv och operatörsberoende kommer vi också att utföra en objektiv utvärdering med datorstödd analys baserad på bildbehandlingsprogram. En kärlregion av intresse kommer att väljas i NBI-läge för riktad mikroskopisk undersökning med pCLE och vävnadsprovtagning för patologi och IHC-bedömning. M-NBI-undersökning kommer också att utföras för normal slemhinna för jämförande analys av det vaskulära mönstret.

Konfokal laserendomikroskopi (CLE) kommer att utföras för visualisering och karakterisering av vaskulära förändringar inuti tumören, med hjälp av det sondbaserade CLE-systemet (pCLE). Den snabbare bildupptagningshastigheten för pCLE-systemet (12 bilder per sekund) möjliggör direkt in vivo-visualisering av blodflödet. Den största fördelen med pCLE-systemet är att det enkelt kan integreras i avbildningsprotokollet eftersom dess flexibla kateterprober kan passeras genom endoskopens arbetskanaler när det kärlområde av intresse har valts med M-NBI. För pCLE-undersökningar kommer vi att använda fluorescein som kontrastmedel som redan är godkänt för in vivo humanundersökningar. Fluorescein administreras intravenöst, vilket framhäver kärlen och omgivande epitelstrukturer. Det vaskulära mönstret kommer att bedömas i realtid såväl som off-site baserat på objektiva mätningar av de lagrade sekvenserna som kommer att inkludera olika vaskulära parametrar (kärldiameter, vaskulär densitet). Dessa kommer att bestämmas för både tumörvävnad och normal intilliggande slemhinna som kontroll, med hjälp av dedikerad programvara.

Immunhistokemi (IHC)-analys med MVD-beräkningar kommer att bedömas och korreleras till avbildningsfynden. Parade biopsier av tumörer och normal GI-slemhinna erhållna under endoskopiska procedurer (som säkerställer samregistrering med M-NBI och pCLE undersökta regioner) kommer att bearbetas för fixering i 10 % neutralt buffrat formalin (NBF), paraffininbäddning och sektionering. För MVD-analys kommer blocken att skäras helt i seriella sektioner 4-25 μm tjocka, med en tjock sektion för var 10:e tunna sektion. För att bedöma den totala vaskulära arkitekturen kommer vi att använda icke-selektiva endotelcellsmarkörer, såsom anti-CD31 och anti-CD34 antikroppar.