STUDIE AV OVERLEVELSE OG FUNKSJONALITET I KRYOPESERVERTE TROMBLETTER

HYPOTESE: Gjennom kryokonservering er det mulig å forlenge overlevelsestiden for blodplater opptil 4 ganger, sammenlignet med de som er bevart under den konvensjonelle metoden, og opprettholde en levedyktighet lik eller større enn 50 %.

Det er en direkte sammenheng mellom overlevelsestid, levedyktighet og funksjonalitet til kryokonserverte blodplater avhengig av modellen av kryobeskyttende løsning som brukes.

PRIMÆRT UTKOMST: overlevelse av kryokonserverte blodplater i mer enn 28 dager SEKUNDÆR UTKOMST: levedyktighet av kryokonserverte blodplater større enn 50 %

INKLUSJONSKRITERIER: Konsentrater fra givere over 18 år som oppfyller kravene fastsatt ved lov 22990 (av den argentinske republikken) for å donere blod og blodkomponenter vil bli inkludert i denne studien, hvorfra et antall blodplater større enn eller lik 3 x10 E11 kan samles.

EXKLUSJONSKRITERIER: Blodplatekonsentrater som har noen av følgende egenskaper vil bli ekskludert fra undersøkelsen:

Konsentrater som ikke har oppfylt alle standardene som kreves for bruk hos mennesker, eller som på tidspunktet for studien har gått mer enn 24 timer siden de ble oppnådd.

En blind eksperimentell studie vil bli utført (de som evaluerer levedyktigheten og funksjonaliteten til blodplater vil ikke vite kryokonserveringstidene eller konsentrasjonen av kryokonserveringsmidlet)

Alikvoter av blodplater med gruppe og faktor A +, A-, B +, B-, AB +, AB-, O + og O- hentet fra de personene som kommer til hemoterapisenteret som frivillige givere og som igjen gir uttrykk for sin beslutning å delta i denne protokollen ved å signere et informert samtykke designet for dette formålet. Innhenting av blodplater vil bli utført ved aferese ved bruk av Trima ACCEL-celleseparator, versjon 7.0, TERUMO BCT-merket.

Et minimum totalt på 3,3 x1011 blodplater vil bli oppnådd i et volum mellom 200 - 300 ml, for hver donor.

Gruppe A: Den vil bestå av 70 alikvoter på 3 ml hver med 1,9 x 109 blodplater som tilsettes en løsning bestående av: 1 ml oppnådd fra følgende blanding (0,8 ml 100 % dimetylsulfoksid (DMSO) og 4 ml 0 natrium klorid, 9%). De vil da fryses ved -80 °C.

B-gruppe: Den vil bestå av 70 alikvoter på 3 ml hver med 1,9 x 109 blodplater som tilsettes en løsning bestående av: 0,4 ml 20 % UNC merkealbumin og 0,6 ml oppnådd fra følgende blanding (1,4 ml dimetylsulfoksid (DMSO) 100 % og 4 ml dekstrose 5 %). De vil da fryses ved -80 °C.

Gruppe C: Den vil bestå av 70 alikvoter på 3 ml hver med 1,9 x 109 blodplater som vil bli tilsatt en løsning bestående av: 0,4 ml 20 % UNC merkealbumin og 0,6 ml oppnådd fra følgende blanding (1,4 ml dimetylsulfoksid (DMSO) 100 % og 4 ml 0,9 % natriumklorid). De vil da fryses ved -80 °C.

En gruppe på 71 alikvoter på 3 ml hver med 1,9 x 109 bestrålte blodplater holdt ved 22 °C under konstant omrøring i 5 dager (tjuefire alikvoter for hver evaluert tidsperiode) vil bli brukt som referanse for sammenligning av resultater (gruppe) N).

Levedyktighet:

Det vil bli evaluert gjennom blodplatetellingen utført av Beckman-Coulter-systemet, måling av pH til de kryokonserverte blodplatene etter å ha blitt tint (forventede verdier mellom 6,4 og 7,4) og immunfenotyping av blodplatene ved flowcytometri (CMF) ved hjelp av fluorescerende anti CD61-PE antistoffer.

Funksjonalitet:

Det vil bli evaluert fra immunfenotyping av blodplater ved flowcytometri (CMF) ved bruk av fluorescerende anti-CD41 og anti-CD62-FITC antistoffer.

Før CMF-analysen utføres, vil 4 mikroliter av en 50 mmol ADP-løsning tilsettes til hver prøve for å indusere blodplateaktivering.

Både levedyktighetsanalysen og funksjonaliteten til det kryokonserverte produktet vil bli utført av 3 biokjemikere, samarbeidende medlemmer av forskningen i det biokjemiske analyselaboratoriet på sykehuset.