STUDIE AV ÖVERLEVANDE OCH FUNKTIONALITET HOS KRYOPRESERVERADE PLATHETER

HYPOTES: Genom kryokonservering är det möjligt att förlänga överlevnadstiden för trombocyter upp till 4 gånger, jämfört med de som bevaras enligt den konventionella metoden, och bibehålla en livskraft lika med eller större än 50%.

Det finns ett direkt samband mellan överlevnadstid, livsduglighet och funktionalitet hos kryokonserverade blodplättar beroende på vilken modell av kryoskyddande lösning som används.

PRIMÄRT UTGÅNG: överlevnad av kryokonserverade trombocyter mer än 28 dagar SEKUNDÄRT UTKOMST: livsduglighet för kryokonserverade blodplättar större än 50 %

INKLUSIONSKRITERIER: Koncentrat från donatorer över 18 år som uppfyller kraven enligt lag 22990 (av Argentina) för att donera blod och blodkomponenter kommer att inkluderas i denna studie, från vilka ett antal blodplättar större än eller lika med 3 x 10 E11 kan hämtas.

EXKLUSIONSKRITERIER: Trombocytkoncentrat som har någon av följande egenskaper kommer att uteslutas från undersökningen:

Koncentrat som inte har uppfyllt alla standarder som krävs för användning på människor eller som vid tidpunkten för studien har gått mer än 24 timmar sedan de erhölls.

En blind experimentell studie kommer att genomföras (de som utvärderar livsduglighet och funktionalitet hos blodplättar kommer inte att känna till kryokonserveringstiderna eller koncentrationen av kryokonserveringsmedlet)

Alikvoter av blodplättar med grupp och faktor A+, A-, B+, B-, AB+, AB-, O+ och O- erhållna från de personer som kommer till hemoterapicentret som frivilliga donatorer och som i sin tur uttrycker sitt beslut att delta i detta protokoll genom att underteckna ett informerat samtycke utformat för detta ändamål. Erhållande av blodplättar kommer att utföras genom aferes med Trima ACCEL-cellseparator, version 7.0, TERUMO BCT-märket.

Minst totalt 3,3 x1011 blodplättar kommer att erhållas i en volym mellan 200 - 300 ml, för varje givare.

Grupp A: Den kommer att bestå av 70 alikvoter om 3 ml vardera med 1,9 x 109 blodplättar till vilka en lösning bestående av: 1 ml erhållen från följande blandning kommer att tillsättas (0,8 ml 100 % dimetylsulfoxid (DMSO) och 4 ml 0 natrium klorid, 9%). De kommer sedan att frysas vid -80 ° C.

B-grupp: Den kommer att bestå av 70 alikvoter om 3 ml vardera med 1,9 x 109 blodplättar till vilka kommer att tillsättas en lösning bestående av: 0,4 ml 20 % UNC-märkt albumin och 0,6 ml erhållet från följande blandning (1,4 ml dimetylsulfoxid (DMSO) 100 % och 4 ml dextros 5 %). De kommer sedan att frysas vid -80 ° C.

Grupp C: Den kommer att bestå av 70 alikvoter om 3 ml vardera med 1,9 x 109 blodplättar till vilka kommer att tillsättas en lösning bestående av: 0,4 ml 20 % UNC-märkt albumin och 0,6 ml erhållet från följande blandning (1,4 ml dimetylsulfoxid (DMSO) 100 % och 4 ml 0,9 % natriumklorid). De kommer sedan att frysas vid -80 ° C.

En grupp om 71 alikvoter om 3 ml vardera med 1,9 x109 bestrålade blodplättar hållna vid 22 ° C under konstant omrörning i 5 dagar (tjugofyra alikvoter för varje utvärderad tidsperiod) kommer att användas som referens för jämförelsen av resultat (grupp). N).

Livskraft:

Det kommer att utvärderas genom trombocyträkningen som utförs av Beckman-Coulter-systemet, mätningen av pH för de kryokonserverade blodplättarna efter upptining (förväntade värden mellan 6,4 och 7,4) och immunfenotypning av blodplättarna med flödescytometri (CMF) med hjälp av fluorescerande anti-CD61-PE-antikroppar.

Funktionalitet:

Det kommer att utvärderas från immunfenotypning av blodplättar genom flödescytometri (CMF) med fluorescerande anti-CD41- och anti-CD62-FITC-antikroppar.

Innan CMF-analysen utförs kommer 4 mikroliter av en 50 mmol ADP-lösning att tillsättas till varje prov för att inducera trombocytaktivering.

Både livsduglighetsanalysen och funktionaliteten hos den kryokonserverade produkten kommer att utföras av 3 biokemister, samarbetande medlemmar av forskningen i sjukhusets biokemiska analyslaboratorium.