동결보존 혈소판의 생존 및 기능 연구

가설: 동결보존을 통해 50% 이상의 생존율을 유지하면서 기존 방법에 비해 4배까지 혈소판의 생존기간을 연장할 수 있다.

사용된 냉동 보호 용액의 모델에 따라 냉동 보존된 혈소판의 생존 시간, 생존력 및 기능 사이에는 직접적인 관계가 있습니다.

1차 결과: 28일 이상의 동결 보존 혈소판 생존 2차 결과: 50% 이상의 동결 보존 혈소판 생존율

포함 기준: 혈액 및 혈액 성분 기증에 대한 법률 22990(아르헨티나 공화국)에 의해 설정된 요구 사항을 충족하는 18세 이상의 기증자의 농축물이 이 연구에 포함되며, 이들의 혈소판 수가 3 x10 이상입니다. E11을 수집할 수 있습니다.

제외 기준: 다음 특성 중 하나를 나타내는 혈소판 농축액은 조사에서 제외됩니다.

인간에게 사용하기 위해 요구되는 모든 기준을 충족하지 못하거나 연구 시점에 얻은 후 24시간 이상이 경과한 농축액.

맹검 실험 연구가 수행됩니다(혈소판의 생존력과 기능성을 평가하는 사람들은 동결 보존 시간이나 동결 보존제의 농도를 알지 못할 것입니다)

자발적인 기증자로 혈액 요법 센터에 와서 결정을 표현한 사람들로부터 얻은 그룹 및 인자 A +, A-, B +, B-, AB +, AB-, O + 및 O-를 갖는 혈소판 분취량 이 목적을 위해 고안된 정보에 입각한 동의서에 서명함으로써 이 프로토콜에 참여합니다. 혈소판 채취는 Trima ACCEL 세포 분리기 버전 7.0, TERUMO BCT 브랜드를 사용하여 성분채집술로 수행됩니다.

각 기증자에 대해 최소 총 3.3 x1011 혈소판이 200 - 300ml 사이의 부피로 확보됩니다.

그룹 A: 1.9 x109 혈소판이 있는 각각 3ml씩 70개 분취량으로 구성되며 다음 혼합물에서 얻은 1ml(100% 디메틸설폭사이드(DMSO) 0.8ml 및 0 나트륨 4ml)로 구성된 용액으로 구성됩니다. 염화물 , 9%). 그런 다음 -80 ° C에서 동결됩니다.

B 그룹: 1.9 x109 혈소판을 포함하는 각각 3ml씩 70개 분취량으로 구성되며 여기에 20% UNC 브랜드 알부민 0.4ml 및 다음 혼합물에서 얻은 0.6ml(디메틸설폭사이드 1.4ml)로 구성된 용액이 추가됩니다. (DMSO) 100% 및 4ml의 덱스트로스 5%). 그런 다음 -80 ° C에서 동결됩니다.

그룹 C: 1.9 x109 혈소판이 있는 각각 3ml씩 70개 분취량으로 구성되며 여기에는 20% UNC 브랜드 알부민 0.4ml와 다음 혼합물(1.4ml의 디메틸술폭사이드)에서 얻은 0.6ml로 구성된 용액이 추가됩니다. (DMSO) 100% 및 0.9% 염화나트륨 4ml). 그런 다음 -80 ° C에서 동결됩니다.

5일 동안 일정한 교반 하에 22℃에서 유지된 1.9 x109 조사된 혈소판을 갖는 각각 3ml의 71개 분취량 그룹(각 평가 기간 동안 24개 분취량)은 결과 비교를 위한 기준으로 사용될 것이다(그룹 N).

생존 능력:

Beckman-Coulter 시스템에 의해 수행되는 혈소판 수, 해동 후 동결 보존된 혈소판의 pH 측정(6.4~7.4 사이의 예상 값) 및 유세포 분석법(CMF)에 의한 혈소판의 면역 표현형 분석을 통해 평가됩니다. 형광 항 CD61-PE 항체.

기능:

형광 항-CD41 및 항-CD62-FITC 항체를 사용하여 유동 세포측정법(CMF)에 의한 혈소판의 면역 표현형 분석으로부터 평가될 것입니다.

CMF 분석을 수행하기 전에 혈소판 활성화를 유도하기 위해 50mmol ADP 용액 4마이크로리터를 각 샘플에 첨가합니다.

냉동 보존 제품의 생존 능력 분석과 기능성은 모두 병원의 생화학 분석 연구실에서 공동 연구 구성원인 3명의 생화학자에 의해 수행됩니다.